测定体外扩增后肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）中淋巴细胞亚群分布的特点，在于了解肿瘤TILs 群体中免疫细胞（主要是T细胞）亚群的组成。通过分析和评估各类亚群分布的比率，可以推测TILs 的总体功能状态。也就是，通过测定TILs中T细胞亚群的比例和标志物的表达特点，评估TILs细胞对肿瘤细胞的反应状态和抗肿瘤活性。扩增中和扩增后的TILs是由大量不同类别的抗肿瘤效应T细胞（Effectors)或调节性T细胞（Tregs）等组成的，这些不同类别的TILs都是继承性T细胞疗法（adoptive T cells therapy)介导的抗肿瘤免疫反应中的关键角色。因此，评估T亚群的分布状态和比率，可以更好地了解各培养扩增批次TILs的抗肿瘤活性，持续性抗肿瘤潜力和T细胞衰竭趋势等重要指标，进而制定结合实际，尽可能为患者量身定制，有效的抗肿瘤治疗方案。 

目前考虑到的TILs扩增后的T细胞亚群标志物的检测应该包括（但可能不局限于）以下群体： 

总体检测：CD3/CD4/CD8/CD16 

Cytotoxic T cells： CD3/CD8   细胞毒性T细胞 

CD8+T细胞亚群 

Naïve CD8+T cells（初始T细胞）：CD3+/CD8+, CD45RA+, CD45RO-, CD197 (CCR7)+

TE, effector T cells（效应T细胞）：CD3+/CD8+, CD45RA+, CD45RO-, CD197 (CCR7)-

TCM, central memory T cells（中心记忆细胞）：CD3+/CD8+, CD45RA-, CD45RO+, CD197 (CCR7)+

TEM, effector memory T cells (效应记忆细胞)：CD3+/CD8+, CD45RA-, CD45RO+, CD197 (CCR7)-

Tpex, precursor exhausted cell (前体耗竭细胞)：CD3+/CD8+, PD-1+, LAG-3-, TIM3-

Tex, T cell exhaustion (耗竭细胞)：CD3+/CD8+, PD-1+, LAG3+, TIM3+

2. Helper T cells： CD3/CD4  辅助性T细胞

CD4+T细胞亚群                

Naïve CD4+T cells（初始T细胞）：CD3+/CD4+, CD45RA+, CD45RO-, CD197 (CCR7)+

TE, effector T cells（效应T细胞）：CD3+/CD4+, CD45RA+, CD45RO-, CD197 (CCR7)-

TCM, central memory T cells（中心记忆细胞）：CD3+/CD4+, CD45RA-, CD45RO+, CD197 (CCR7)+

TEM, effector memory T cells (效应记忆细胞)：CD3+/CD4+, CD45RA-, CD45RO+, CD197 (CCR7)-

Tpex, precursor exhausted cell (前体耗竭细胞)：CD3+/CD4+, PD-1+, LAG-3-, TIM3-

Tex, T cell exhaustion (耗竭细胞)：CD3+/CD4+, PD-1+, LAG3+, TIM3+

3. Treg:  CD4/CD25/Fox p3   调节性T细胞

4. Anergic T cells:  CD3/BTLA(CD272)   无活性T细胞  (B/T淋巴细胞弱化因子)

5. CD137+ /PD-1+/CD103+/CD39+  (naturally occurring tumor antigen-specific TILs)

现在对T淋巴细胞亚群的分类和认知要比以前复杂多了。关于淋巴细胞亚群的检测，本人如果不够谦虚的说话，自以为还是有点小小的老资格。40年前，我从83年做硕士研究生时，选择了这方面的课题，那时国内好像还没见有这方面的研究报告。当时我们临床科室实验室的条件还是有限，没建立相关的检测平台。我的导师汪月增教授，就介绍我去了军事医学科学院三所。三所是基础医学研究所，所长唐佩弦教授，和汪老师是在北医的大学同学。

我当时去的是白炎老师的免疫实验室。那时，白炎老师刚刚从法国（记忆里是的）留学回来，带回了不少单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中T细胞亚群的单抗是我能用到的。记得当时实验室里有个老技术员陈子兴，做白老师本人的课题。另一个实验员曾海群，帮我做些工作，我从她那里学会了用间接免疫荧光法标记淋巴细胞。白老师和曾海群都是名人之后，用现在的术语，也叫做红2代吧。白老师的爸爸，据说是中华医学会的首届会长白希清。曾海群的伯父据说也是国家级的领导人。Anyway，都不是等闲之辈。当时三所有3个青年学术带头人，白炎老师，沈培奋老师和姚子建老师，而白炎老师是各中的姣姣者。“光阴流逝，岁月弄人”，我硕士毕业不久，就听到白炎老师不幸离世的消息，不胜感伤，难于释怀。后来姚子建老师也因故离开了军科院。“千淘万漉虽辛苦，吹尽狂沙始到金”，沈培奋老师最终当选了科学院院士。

我学会了标记淋巴细胞之后，就回到医院里。那时还没有流式细胞仪，汪老师从院里申请了一台Olympus荧光显微镜，很快就到位了。回忆当时也很不容易，我是手持计数器，在暗室里，一个荧光细胞，一个非荧光细胞，数出来的淋巴细胞亚群数据。先是获得的了40例正常值，送到院里学报发表了。当时也没意识到，这个正常值可能是国内最早的淋巴细胞亚群的数据。在此基础上有关淋巴细胞亚群与临床疾病相关性的硕士论文，分别发表于当时的中华血液，中华医学和中华内科杂志上。总算未辜负导师们的谆谆教诲。

那时的单克隆抗体还不是现在的CD分类系统，是Leu系统和OKT系统。不过，当时我在荧光显微镜下计数的淋巴细胞亚群的正常值范围，和现在流式细胞仪检测的正常值数据是一致的，看来当时的工作还是很严谨的，经受住了时间的考验。现在又回到TILs的工作，要重拾淋巴细胞亚群的分类的检测，只是科学已经爆发式的发展，正可谓：“沉舟侧畔千帆过，病树前头万木春”。新的多通道流式细胞仪技术，可以同时检测多个TILs细胞亚群的表面标志，对指导TILs细胞更为规范化的体外培养/扩增，以及临床应用，可以发挥重要的作用。