一、产品简介：

果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸等形式广泛分布于植物果实、根茎和叶中。果胶和纤维素以及金属离子等物质相结合形成不溶于水的原果胶，在果蔬成熟过程中转变为可溶性果胶，果实组织也变得软化、硬度下降。

本试剂盒采用咔唑比色法测定可溶性果胶含量。可溶性果胶在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质在530nm 处有最大吸收峰。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、无水乙醇、浓硫酸、丙酮、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 称取50 mg样本，加入1.5mL提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴浸提20 min（密封以防止水分散失），取出冷却至室温，4000g，25℃离心10 min，弃上清，留沉淀；

② 向上步沉淀中加入 1mL 提取液一充分混匀，95℃水浴浸提25min（密封以防止水分散失），取出冷却至室温，4000g，25℃离心 10 min，弃上清，留沉淀；

③ 向上步沉淀中加入1mL丙酮洗一次，涡旋振荡2 min，4000g，25℃离心10 min，弃上清，剩余少量丙酮应挥干（挥干至无明显水渍即可），留沉淀，沉淀即为粗细胞壁；

④ 向上步沉淀中加入 1mL 提取液一充分混匀，涡旋振荡2 min，4000g，25℃离心 10 min，弃上清，留沉淀；

⑤ 将步骤③和④操作重复一次；

⑥ 沉淀中加入1mL提取液二充分混匀，25℃，浸泡15 h（去除淀粉），4000g，25℃离心10 min，弃上清，留沉淀；

⑦ 沉淀中加入1mL 提取液三混匀，50℃水浴30min，取出冷却至室温，8000g，25℃离心10min，弃沉淀，取上清液待测。

2、标准溶液的配制：把50μmol/mL标准品母液用蒸馏水稀释成4、3、2、1、0.5、0.25 μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

2、可溶性果胶含量(μmol /g 质量)= x×V÷W×D=x÷W×D

V：加入提取液体积，1mL；                         W：样本质量，g；

D：稀释倍数，未稀释即为1。

注意事项：

1、浓硫酸必须是分析纯级别，且不能长期开口放置，否则影响显色结果。另外浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。

2、显色反应必须在暗处反应，否则颜色很快消失或者变淡，影响吸光值。