一、产品简介：

蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基能与染料分子结合。染料分子在游离状态下呈红色，其最大吸收波长为465nm；当它与蛋白质结合后变为蓝色，其最大吸收波长为595nm，在该波长下其吸光度的大小与蛋白质含量成正比，因而可用于蛋白质的定量测定。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、超声细胞破碎仪、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆后，12000rpm，4℃离心10min，取上清待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心10min，取上清液待测。【注】：若增加样本量，可按照细胞数量（万）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

③ 液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。

2、标准溶液的配制：把2mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成0.0625mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至595nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验A测定－A空白﹥0.2，需将样本用蒸馏水稀释后再测定，以确保测定的准确性；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、按照样本质量计算：

Cpr (mg/g 质量)=C标准品×（A测定-A空白）÷（A标准-A空白）÷W×D

2、按照细胞数量计算：

Cpr (mg/10⁴ cell)=C标准品×(A测定-A空白）÷（A标准-A空白）÷细胞数量×D

3、按照液体体积计算：

Cpr (mg/mL)=C标准品×（A测定-A空白）÷（A标准-A空白）×D

C标准品：标准溶液浓度，0.0625mg/mL；   V：提取液体积，1mL；                                    

W：样本质量，g；                       D：稀释倍数，未稀释即为 1；          

细胞数量：以万计。