一、产品简介：

柠檬苦素是一种三萜类的植物次生代谢产物，主要存于芸香科植物和楝科植中。也是柑橘类水果呈现苦味的主要原因，一般在柑橘属植果实和种子中浓度较高，具有一定的抗癌和抗病毒作用及其他有益生物活性。

实验采用石油醚除脂，然后用丙酮进行提取，470nm处进行吸光值检测。利用柠檬苦素作为标品，根据标曲和样品检测值计算样品中的含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、石油醚、丙酮、无水乙醇和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

组织样本：称取0.05g样本，加入1.5mL石油醚，盖紧混匀后室温涡旋3min，于4000rpm，25℃离心10min，弃石油醚上清（尽量保留沉淀），再加入适量石油醚重复以上操作，至提取物无色为止。最后一步沉淀中加入1.5mL丙酮，混匀后室温涡旋震荡提取3min，于4000rpm，25℃离心10min，取上清待测。

2、标准溶液的配制：把1mg/mL标准品母液用无水乙醇稀释成0.8、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至470nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用乙醇适当稀释后再进行测定，低于最低值可通过增加样本取样质量W，则改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA测定带入方程得到 x（mg/mL）。

2、按照样本质量计算：

柠檬苦素含量(mg/g 质量)=x×V÷W×D=1.5x÷W×D

V：提取液体积，1.5mL；                       W：样品质量，g。            

D：稀释倍数，未稀释即为1。