一、产品简介：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，碱性木聚糖酶（BAX）一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。

BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算BAX活力。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30~50目筛、甲苯和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；

2、标准溶液的配制：把10μmol/mL标准品母液用试剂二稀释成5、4、3、2、1、0.5μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将上清液用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加反应时间T后再进行测定，并将改变后的D、T代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（µmol/mL）。

2、S-BAX活力计算：

单位定义：50℃、中性条件下，每g土壤每天分解木聚糖产生1μmol木糖定义为一个酶活力单位(U)。

S-BAX活力(U/g土样)=x×V÷W÷T×D=10.56×x÷W×D

V：反应总体积，0.22mL；          T：反应时间，30min=1/48d；

W：土壤样本实际取样量，g；       D：稀释倍数，未稀释即为1。