一、产品简介：

土壤磷酸二酯酶（S-PDE，EC3.1.4.1）是在土壤磷酸单酯酶之后的的第二大磷酸酶。其在土壤有机磷的循环代谢中起到重要作用。

本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的的检测方法。土壤磷酸二酯酶（S-PDE）催化双(4-硝基苯)磷酸酯（BNPP）生成黄色的产物PNP，该产物在400nm处有最大吸收峰。通过检测PNP在400nm下的增加速率，即可得到S-PDE酶活性大小。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30~50目筛、甲苯、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

2、标准溶液的配制：把10µmol/mL标准品母液用试剂一稀释成1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将样本适当稀释后再进行测定，并将改变后的D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（µmol/mL）。

2、活性计算：

单位定义：在37℃，每克土壤每小时水解BNPP产生1nmolPNP定义为1个酶活单位（U）。

S-PDE活性(U/g土样)=x×V×10³÷W÷T×D=220×x÷W×D

T：催化反应时间，1h；                   V：反应阶段反应体积，0.22mL；

W：土壤样品质量，g；                   D：稀释倍数，未稀释即为1。