一、产品简介：

多种微生物、动物、植物等都可产生几丁质酶，高等植物本身不存在作为真菌细胞壁组分之一的几丁质，但当植物受到病原菌感染时，几丁质酶活性迅速提高。因此该酶与植物对病原微生物的抗性有关，是重要的病程相关蛋白。

几丁质酶主要水解几丁质多聚体中的β-1,4-糖苷键，依据水解口位置的不同可分为内切几丁质酶和外切几丁质酶。几丁质酶催化几丁质水解形成的产物为N-乙酰葡萄糖胺（Glc-NAcc）单体，产物在580nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征几丁质酶的活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30~50目筛、甲苯、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样风干，过30-50目筛。称取约0.1g土样，加入0.05mL试剂一，混匀，常温静置15min。静置结束后，加入0.2mL试剂二与0.4mL试剂三，37℃振荡反应24h，8000rpm，4℃离心10min（若离心后上清中仍有杂质，建议将上清再次离心，至澄清），取上清液置于冰上待测。

2、标准溶液的配制：把1mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成50μg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至580nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将样本适当稀释后再进行测定，并将改变后的D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

酶活性定义：37℃条件下，每g土壤每天分解几丁质产生1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位（U）。

土壤几丁质酶活性（U/g土样）=（ΔA测定÷ΔA标准×C 标）×V÷W÷T

                           =32.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W

C标：标准管的浓度，50μg/mL；       V：样本处理总体积，0.65mL；

W：样本质量，g；                    T：反应时间，1d。