一、产品简介：

S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。S-LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30~50 目筛、甲苯、丙酮、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm。

② 操作表：

3、正式实验：

① 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

② 正式实验按照预实验上机操作步骤进行。

五、结果计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

酶活性定义：每克土壤每分钟生成1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位（U）。

S-LAP活性（U/g 土样）=ΔA÷(ε×d)×10⁹×V÷W÷T=0.507×ΔA÷W

ε：对硝基苯胺摩尔消光系数：9.87×10³L/mol/cm；    d：比色皿光径，1cm；

V：反应总体积，0.3mL=3×10^-4L；                 W：土样质量，g；

T：反应时间，60min；                            10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下:

酶活性定义：每克土壤每分钟生成1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位（U）。

S-LAP活性（U/g 土样）=ΔA÷(ε×d)×10⁹×V÷W÷T=1.013×ΔA÷W

ε：对硝基苯胺摩尔消光系数：9.87×10³L/mol/cm；    d：96孔板光径，0.5cm；

V：反应总体积，0.3mL=3×10^-4L；                 W：土样质量，g；

T：反应时间，60min；                             10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。