一、产品简介：

硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。

在浓酸条件下，NO₃^-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在强碱条件下呈黄色，该黄色物质在410nm处有最大光吸收，通过比色测定进而计算得植物硝态氮含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、天平、可调式移液器、震荡仪、浓硫酸和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

建议称取约0.1g土样，加入1mL蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取1h，10000g，25℃离心10min，取上清待测。

2、标准溶液的配制：把1000μg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成200、100、50、25、12.5、6.25μg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至410nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将上清液用蒸馏水适当稀释后再进行测定，并将改变后的D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μg/mL）。

2、NO₃^--N含量计算：

硝态氮(NO₃^--N)含量(μg/g土样)=x×V1÷(W×V1÷V)×D=x÷W×D

V：加入提取液的体积，1mL；          V1：样本的加样体积，0.01mL；

W：土壤样本实际取样量，g；           D：稀释倍数，未稀释即为1。

注意事项：

1、土壤胶体不吸附硝酸根离子，易造成分布不均匀情况，因此测定多个样本或重复样本时注意保持相同的采样深度；

2、样本土壤经风干或者烘干很容易引起硝态氮含量的变化，所以建议采用新鲜土壤进行含量测定。样品采集后应4℃密封储存，建议48h内完成检测；若无法及时测定，建议-20℃分装保存；测定时注意解冻时间：室温下需在4h内完成解冻和提取过程，4℃条件下需在48h内完成解冻和提取过程。

3、样本间硝态氮含量进行比较时：因样本间水分含量不同，计算时需将样本间水分误差排除后再进行比较（另取相同质量土样烘干后以干重计算结果）。