一、产品简介：

土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）是反硝化作用的关键酶，它是由土壤反硝化细菌产生的一种还原类酶，参与亚硝酸盐至NO的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）可将NO^2-还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成（粉）红色化合物的NO^2-减少，该（粉）红色物质在540nm有最大吸收峰，通过检测540nm处吸光值的变化来反应土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）的活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30-50目筛和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；

2、标准溶液的配制：把10μmoL/mL标准品母液用蒸馏水稀释成0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125μmoL/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将上清液用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmoL/mL）。

2、S-NiR活力计算：

单位定义：每天每g土样中产生1μmoL的NO₂^-的量定义为一个酶活力单位(U)。

S-NiR活力(U/g土样)=x×V÷W÷T×D=2.4×x÷W×D

V：反应总体积，0.3mL；          T：反应时间，3h=1/8d；

W：土壤样本实际取样量，g；      D：稀释倍数，未稀释即为1。

注意事项：

标准管和空白管2的反应液无沉淀无需离心，直接室温静置15min测定吸光度值即可。