一、产品简介：

咖啡因是一种黄嘌呤生物碱化合物，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。咖啡因广泛存在于咖啡、茶、软饮料及能量饮料中。  咖啡因易溶于水，去除干扰物质后，在 274nm 下测定吸光值计算其含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板（UV板）、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、40-60目筛、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备：

样本烘干粉碎，过 40-60目筛。称取约 0.01g 样本，加入 1.5mL蒸馏水充分混匀，沸水浴加热45min，期间每隔10min震荡一次，取出冷却后12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL（=10000μg/mL）标准品母液用蒸馏水稀释成60、40、20、10、5、2.5 μg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至274nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μg/mL）。

2、咖啡碱含量(μg/g干重)=x×V×V2÷V1÷W×D=18.75×x÷W×D

V：提取液总体积，1.5mL；            V1：加入的样本体积，0.05mL；

V2：反应总体积，0.625mL；           W：样品质量，g；                        

D：稀释倍数，未稀释即为1。