一、产品简介：

β-葡聚糖化学名称为：(1-3) (1-4)-β-D-葡聚糖，是一类非淀粉多糖；研究发现，β-葡聚糖具有抗癌、降血脂、降血糖等功效。  本试剂盒利用葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶对样品中的(1-3) (1-4)-β-D-葡聚糖的酶解作用，由地衣聚糖酶转一性地水解β-葡聚糖成寡糖，β-葡萄糖苷酶则将寡糖水解成葡萄糖；葡萄糖被特异性氧化以产生与显色剂反应的（粉）红色产物，该产物在510nm有最大吸收峰，进而计算得出β-葡聚糖含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、涡旋振荡器、40目筛、无水乙醇、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备：

① 样本烘干粉碎，过40目筛。称取约0.05g烘干样本，加入1mL 80%乙醇，充分震荡混匀，80℃水浴10min后，取出冷却至室温。3000g，25℃离心10min，弃上清留沉淀，沉淀中再加入1mL 80%乙醇重复操作一次，离心后去上清留沉淀。

② 上步沉淀中加入0.8mL 试剂一，充分震荡混匀，95℃沸水浴5min，取出冷却至室温，加入40μL试剂二，剧烈振荡数秒，置于50℃恒温水浴锅中反应60min。

③ 取出冷却至室温，加入1mL 试剂三，充分混匀。5000g，25℃离心10min，取上清待测。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用试剂五稀释成2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2.按照样本质量计算：

β -葡聚糖含量（mg/g质量）=x×V2÷（W×V1÷V）×0.9×D=16.56×x÷W×D

V1：反应体系中样本体积，0.02mL；                   V2：反应体系总体积，0.2mL；

V：提取液总体积，1.84mL；            0.9：葡萄糖转化为β-葡聚糖的脱水转换因子；

D：稀释倍数，未稀释即为1；                       W：样本质量，g。