一、产品简介：

超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，引 起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基 的研究已经得到了广泛的关注。

在弱碱性条件下，邻苯三酚能发生自氧化反应产生超氧阴离子和有色中间产物，该中间产物在320nm处有特征吸收峰。当加入超氧阴离子清除剂时，它能迅速与超氧阴离子反应从而阻止中间产物的积累，使溶液在320nm处光吸收减弱。故可以通过测定A320nm值来评价清除剂对超氧阴离子的清除能力。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板（UV板）、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取0.1g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至320nm。

② 试剂一和二需于室温（25℃）预热20min。

③ 操作表：

4、正式实验：

① 若 A 测定减 A 对照的差值大于空白管，需增加样本加样量（如由10μL 增至 30μL，则试剂一相应减少）；若 A 测定减A 对照的差值小于 0.1，需对样本适当稀释后再检测；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

超氧阴离子清除率 I%=[1-(A测定-A对照)÷A空白]×100%

注意事项：

不同样本清除能力不一，可先选取2个样本做预实验检测。