一、产品简介：

ABTS法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用最广泛的间接检测方法。ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子ABTS自由基，在405nm处有最大吸收峰。当有抗氧化剂存在时，ABTS 自由基被清除，会发生脱色反应。因此通过测定吸光度下降的程度来反映样本清除ABTS自由基的能力。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取约0.1g新鲜组织或者称取约0.02g烘干样本（将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，粉碎，过40目筛，得到烘干样本），加入1mL提取液（若鲜样需研磨均质），于60℃，200-300W条件下超声提取30min（间隔5min振荡混匀一次），若有损失需用提取液定容至1mL。12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清待测。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 不同样本清除 ABTS 自由基的能力可能相差很大，为保证实验结果的准确性，样本要根据预实验结果进行适当调整（如清除率大于90%，建议将提取的样本用无水乙醇进行稀释；清除率小于5%，建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取）；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

ABTS自由基清除率（%）=［(A空白-A标准）÷A空白×100］%

注意事项：

样本建议当天提取，当天检测。