一、产品简介：

体系内各种抗氧化大分子、小分子和酶的总水平，反映了该体系内的总抗氧化能力（T-AOC）。T-AOC能更全面地评价体液、细胞和组织匀浆、食品和饮料的抗氧化剂含量，广泛应用于医学、食品科学等相关研究。

DPPH为稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，在515nm处有强吸收。当有抗氧化剂存在时，DPPH 自由基被清除，会发生脱色反应。因此可通过检测吸光度的变化，并以标准品作为对照体系来量化抗氧化物质的抗氧化能力。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取约0.1g新鲜组织或者称取约0.02g烘干样本（将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，粉碎，过40目筛，得到烘干样本），加入1mL提取液（若鲜样需研磨均质），于60℃，200-300W条件下超声提取30min（间隔5min振荡混匀一次），若有损失需用提取液定容至1mL。12000rpm，25℃离心10min，取上清测定。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm，25℃离心10min，取上清测定。【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、标准溶液的配制：把20μmol/mL标准品母液用提取液稀释成1.2、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至515nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 不同样本清除DPPH自由基的能力可能相差很大，为保证实验结果的准确性，样本要根据预实验结果进行适当调整（如清除率大于80%，建议将提取的样本用试剂一进行稀释；如清除率小于20%，建议加大样本质量），并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的清除率（%）为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将清除率带入方程得到x（μmol/mL）。

标准品DPPH自由基清除率（%）=［(A空白-A标准)÷A空白×100］%

2、样本DPPH自由基清除率（%）=［(1-(A测定-A对照)÷A空白)×100］%

3、定义：用从标准曲线上获得的抗氧化剂的量来表示样本的DPPH自由基清除能力。

4、按样本质量计算：

DPPH自由基清除能力(μmol/g 质量)=x×V1÷(V1÷V×W) ×D=x÷W×D                                

5、按细菌/细胞计算：

DPPH自由基清除能力(μmol/10⁴ cell)=x×V1÷(V1÷V×N) ×D=x÷N×D

6、液体样本：

DPPH自由基清除能力(μmol/mL)=x×V1÷V1×D=x×D

V：加入提取液体积，1mL；           V1：反应中样本体积，0.01mL；

W：样本质量，g；                    N：细胞数量，以万计；

D：稀释倍数，未稀释即为1。

注意事项：

样本建议当天提取，当天检测。