转染——让克隆的核酸进入真核细胞中，已经成为研究和控制真核细胞基因表达的重要手段。比如表达纯化特定的蛋白；鉴定一个基因的生物学特性；突变分析；研究基因表达对细胞生长的影响，研究基因表达的调控机制等等，等等。如今广义的转染不单包括了DNA、RNA，还有蛋白质等生物大分子。

影响转染效率因素众多、细胞本身质量、各类细胞特性（这点我们优势很大，常年统计难养细胞问题）、转染试剂选择类型、质粒质量、转染方法、等。本品开发目的就是针对较难转染细胞开发，免疫类细胞、原代细胞、或对转染后荧光，病毒等表达时间要求较长或病毒滴度要求高及上清收获的方案开发，前期预实验建议从293类好转染细胞预实验后，在开始目的难转细胞。先对试剂特性有所了解后。在做293类细胞，本品可六天长时间荧光表达或病毒作用及上清收获蛋白。（辅助有促贴壁试剂，与转染前细胞状态调整，消化要求等建议参考，注明实验室用户，可发细胞图片，我们免费评价参考，深入沟通的用户，可注明细胞来源，试剂厂家，某些习惯操作手法也是大家谈论同一细胞形态差别大我司统计认为观点，我们给您建议与参考，我司有对各类难养细胞常年统计细节的习惯。质粒提取盒子，我们有推荐，越贵越好）

细工六年以上案例问题统计，2021正式列装目录，就难点痛点做些小总结。

难转细胞类成团成片类：腺类、免疫类 、上皮类，无血清新换液后（都有容易成团成片，该特性还影响冻存复苏细胞活率，这里不展开，有同类问题用户可讨论）。

免疫保护类：原代、免疫类，原代培养过程中正常传代很重要，所以细工一致主推含血请方案，让二维培养先能正常及大量收货细胞后，在分析转染问题比较稳妥，无血清要是培养都成问题，到转染问题极难分析。目前流行反转法可讨论，我们potocol围绕为工业生产，有需要可来信告知。

2021年开始细工第五批次优化后转染试剂一些心得参考：产品开发思路主旨：先用量少，毒性小，转染后换液是评价各厂家试剂优略一个小标准参考，尽量用到大牌子，这里不便说的具体，可通过案例及实施讨论验证（细工开发这类试剂工业目的，超强冗余也给生产应用提供一份国产备份试剂，如果验证理想，给种子库级别试剂多一份备份体系，如认为这类方法可行，还建议做超长时间维持培养体系验证，培养体系在细胞培养中代谢后维持长短判断培养体系优略。该步骤都是为后面难转细胞做足充分备份技术。

相关参考细胞转染前状态调整参考

胰酶：

胰酶统计了六年，推出我们的Optimized Trypsin（下面有产品链接），对胰酶挑剔的细胞有易成团的神经胶质类、肝类、乳腺癌类、胰岛胰腺类、免疫悬浮（这个成团也可通过离心后，加入低浓度胰酶解决团聚）团聚问题

不解决，冻存后的细胞团DMSO深入不充分，容易有冰晶形成损伤细胞，导致复苏后状态不理想，成团成片细胞培养过程中中间细胞得不到完全培养基营养吸收。通过反复多家实验室验证，这点可用我们推荐胰酶，常温消化，完全利用化学作用，无机械力消化成单个细胞，按我们方法与0.25浓度胰酶消化后，吹打散细胞方法冻存后复苏比较细胞成活率，这个成活率高低，也是转染率高低理由。

促贴壁试剂：

为工业应用，自动化培养贴壁悬浮，反之细胞驯化培养做技术储备，该试剂在目前蛋白生产应用已有七年以上工业案例，及相关应用需求开发，

转染过程中，对容易漂的细胞一个很好的解决方案

免疫荧光中应用，细胞更舒展，细胞器件清晰可见。

特别是感染细胞生产病毒过程中，细胞与病毒作用时间长，病毒滴度高等优点，

平时培养过程中使用，细胞着床快，明显优于不使用促贴壁培养方法，按理细胞目前有上百代生产应用，链接里有相关案例介绍，与救助珍贵细胞。

耐药株筛选问题：加药后，细胞容易受损伤，易漂，就算做成耐药株后，冻存复苏后容易丢失（活率低，细胞不着床导致）

20210630 工程用大体积培养转染及免疫细胞转染，效果完全覆盖PEI转染效果（PEI起始转染细胞量较少，是与我们转染产品较大差别，转染方法可讨论），原代鸡胚、食管正常细胞转染效果优于同类任意厂家（转染前后细胞培养可深入讨论），有做核酸免疫动物用户，原代转染验证我们可发试用，转染前后细胞调整都可讨论。为提高沟通效率，建议发我们可分享部分的POTOCOL及遇到的问题描述，-以上沟通限定进口试剂耗材。正规细胞库老师要有时间测试，我们全程免费测试，无数量限制。

20221111

要点参考简述及长期统计

liver：解决团聚，正常增殖传代

breast：正常增殖传代

Pancreatic islet：胰酶消化优化

Glia cerebri：成片，锚着

Original generation:离体后处理时间，快

Serum free:缓冲弱

blood：稳妥可行培养方案，增殖较快方案建议验证细胞质量平稳性。

细工优势验证：二倍体类解决（也是上述都属于难养类）培养顺利，有些通用难点，也有各类突出要点。

路过的脂质体高手老师，多多提携啊

20230413

难转染，大体量转染，大质粒转染参考

难转染细胞-增强贴壁试剂辅助处理方法参考

质粒：大质粒，柔和平稳处理可行性更高

细胞：原代免疫类、原代正常类、胶质类。

讨论难点：原代首代处理（细胞质量）、团聚、成片相关细胞特性影响转染效率相关办法讨论，

例如：原代胶原酶处理贴壁不牢（上皮）成纤维胰酶处理差速贴壁筛选。EDTA消化传代处理（干细胞）

免疫类：成球，免疫保护。

二倍体细胞：顺利生长，高质量细胞状态（传代平稳前期验证）

细胞工厂大体量培养后转染优势，细胞培养增殖都有很多的相关技术储备与相关试剂开发。结合转染新方法加入，让批量转染可行性更稳妥。

无PEI成份

全部进口试剂耗材，国产试剂耗材的暂不在讨论范围内

20231211

转染试剂开发进展

细工推出质粒与转染试剂1：1方案，转染试剂毒性低一直是我司该类产品开发主线。提高转染试剂浓度，也是为成球转染，动物体内转染开发应用考虑，有兴趣用户建议留转染详细信息，细工给些参考间建议（细胞名称，生长特点及难点，成团特点，团大小，生长天数，所加辅助因子厂家货号，计量，浓度等。转染目的效果。

20231218

免疫细胞转染细工要点参考

关键点解决细胞团聚，转然前我们推荐Optimized Trypsin优势不是一般的大，解决成团是免疫细胞关键点，用这款一没理由就是对细胞无损特点，膜无损，具体介绍可看产品介绍，通过六年以上案例统计。

关键点反转法，是目前我们统计大品牌转染得效果不错后推荐，下面有相关厂家及货号，该类产品我司辅助锚着是促贴壁试剂辅助，这个产品开发应用五年了（工业病毒生产用，293类）及免疫细胞共聚焦也可以，下面有连接说明说明。

关键点提高病毒滴度，参考下面介绍增强贴壁试剂链接，提高病毒滴度很关键，目前脑胶质溶瘤相关用户可能已到中式（订货量上判断，五年应用，这部分不讨论用户案例，技术部分可以）

关键点突破理由两点相关辅助简单介绍

冻存复苏优化，DMSO方法，提高活率细胞量与质量，目前临床合作实验室PBMC活率80%保守介绍，目标能到尽量在高些，需验证建议用贴壁试剂案例293验证比较稳妥，很多细节要沟通，能做到我们产不多参数，应用免疫细胞应该容易很多。

试剂耗材我们指定，进口耗材，及细工试剂。

巨噬培养生长分化控制，膜提取，转染方面配套该细胞目前只在理论阶段，实施还要很长时间。有涉及转染部分，在沟通讨论。

免疫类原代培养、建系、类器官等，有相关研究可来信注明，更多资料发您，邮件联系。

20240821

常见难点问题：

原代转染（目前流行反转法，需要相关资料可回信告知，细工对该类方法有些统计总结资料，该类比较适合免疫类细胞（免疫保护），其他原代影响特点关键点还没有深入了解，如果老师正在做相关实验，可告知关键点，我们从细胞培养上进行些优化调整，试剂生产上进行更新改造方式生产，技术方法上优化调整。

上述包括资料太多，简述已有解决统计资料有，细胞成团成片、黑点、生长慢都有比较成熟方案。让细胞生长正常并顺利办法较多，结合统计几大类难养细胞常年统计经验技术储备足。

大质粒转染难点痛点参考：

常规基础转染稳定，易重复先行，在上大质粒，建议先行293这类容易转染的先行，在做难养系或原代，

难养类培养顺利要先行（难养类成团成片，增殖较慢）

293培养调整到细胞较优质量后，有条件更换试剂用户，可把您的293培养条件，厂家货号列清楚，发我们细胞团片，分析后，从细胞，试剂，方法给出我司试用，不沟通细节用户不提供。

沟通前基础参数：进口体系，正规库来源细胞，

工业用户：可参考我司单克隆建系生产方式，可行性非常高，已经开始做相关工业用户案例。一年后，如用户允许后，公布案例相关参数，容错率高冗余试剂开发，在后面维持培养科研，生产，自动化培养中优势明显，试剂技术开发过程中合作公司资料全部公开，并多家实验室共同验证。是否可行结果能做到直观，易行，易重复。

目前正式开始对接细胞培养工业应用上游工艺开发，欢迎资深大佬提携并加入并合作。

方向明确：含血清，细胞工厂方案应用，相关试剂，产品开发。

转染试用索取要求：细胞名称，描述是否增殖顺利，不顺利列出试剂厂家货号，细胞来源。目前用转染试剂，及细节讨论，转染预期。

原代建系包含技术面很广，对试剂体系，技术手法经验要求高。细工每一项新产品，新技术都会结合建系为最终目的，所以有相关技术问题统计为主线，近年可提供黑点，生长慢，成瘤不稳定问题，都是来自近年原代、类器官培养中问题统计得到解决思路，并验证后理想结果后推广。

20240828

就痛点难点问题，

2021年开始列装细工目录以来，经过五个批次生产优化调整统计，新批次特点，转染试剂毒性更小，附件图片48小时-96小时不换液细胞图片，转染效果不减，可节省一半转染用量，该特点来自工业应用中大体量液体与细胞转染过程中容错率强，所以做了不换液培养统计，目前技术储备心得值得老师后面生产中参考。就是试剂种子库级别很重要，有条件尽量用大牌子，及平时问题积累解决试剂备份方案（细工所有问题都有备份方案及免费试用，给生产做冗余超强国产备份），细胞经转染后，恢复过程中，种子库级别非常重要，虽然目前转染试剂开发容错率高，转染后还是很关键的，细工在纯国内培养体系建系很是执着，最近开发简易单克隆方法、优化冻存试剂与方法，都是为建系难点提前做技术储备。转染相关高级难题，欢迎老师赏赐，

新说明书附件中-工业或细胞工厂应用、类器官、人造肉可从种子库建系开始讨论。

生产，代理有技术评测条件公司，直接讨论痛点与成本。

细工增强贴壁、转染试剂、血清等自产试剂，能够签长期供货合同组，我们提供工具细胞（全部国内正规库发货）293、293T、293FT

细胞培养相关厂家，课题组，个人，常年做一个方向用户，可参与讨论撰写SOP,精准到秒，理念一致，目的是评价出种子库应用的共享详细可行步骤，细工做试剂、耗材、可行性问题统计。给含血清培养方案拿出共享可行方案。