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DNA甲基化详解

已有 450 次阅读 2024-12-16 14:20 |系统分类:科研笔记

一、表观遗传与甲基化 DNA甲基化是最早被发现、也是研究最深入的表观遗传调控机制之一。 DNA甲基化:在DNA甲基转移酶的作用下,基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶(C)5'碳位共价键结合一个甲基基团。DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达。 二、甲基化研究方法 目前研究中常用的DNA甲基化测序方法包括全基因组(WGBS)、简化基因组(RRBS)、靶向基因组(液相捕获)、甲基化DNA免疫沉淀(MeDIP-seq)和芯片等,适用于多种不同应用场景。 1、甲基化发现阶段 Illumina EPIC 芯片(935K):全面覆盖CpG岛、启 动子等,还包括 岛外的CpG位点,已知的DMR位点 全基因组甲基化测序(WGBS):全 基 因 组 覆 盖 甲 基 化 和 非 甲 基 化 甲基化捕获测序(MC-seq):启动子、已知的DMRs、CpG 岛、shores 简化基因组甲基化测序(RRBS):CpG岛、启动子 甲基化DNA免疫沉淀(MeDIP-seq) 2、甲基化验证阶段 焦磷酸测序:焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是一种新型的酶联级联测序技术,可在一次检测中快速定量一个或多个甲基化位点,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,是目前最理想的验证方法。同时,焦磷酸测序技术产品具备对大量样品进行测序分析的能力,为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行甲基化分析和临床检验提供了平台。

多重目的区域甲基化富集测序:多重目的区域甲基化富集测序,是在全基因组甲基化水平的观察与研究后,对于众多目的基因的 甲基化水平的重要研究手段,更有针对性和大样本可行性。使用亚硫酸氢盐处理DNA后,结合目的区域富集和二代测序技术,利用多重目的区域甲基化富集测序技术实现个性化目的区域甲基化测序,同时大大降低了研究费用。



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