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诱导多能干细胞(iPS)实验方法

已有 7566 次阅读 2012-10-13 08:43 |个人分类:干细胞学|系统分类:科研笔记| 技术, 载体

 
 
诱导多能干细胞(iPS)研究的实验技术:
 
1、【基因导入技术】基因导入技术是制备ips细胞的主要技术,基因载体的改良推动无遗传修饰ips细胞的建立。载体主要有整合型载体、非整合型载体以及新型载体。
· 整合型载体介导的基因导入技术
· 非整合型载体介导的基因导入技术
· 新型载体介导的基因导入技术
 
2、【蛋白质转染技术】

为克服当前基因操作风险,丁胜研究组首次采用蛋白质转染技术制备iPS 细胞 ,添加化学小分子丙戊酸(valproic acid,VPA)情况下,融合穿膜肽11R (poly-arginine) 的蛋 白质组合 11R-Oct4、11R-Sox2、11R-Klf4、11R-c-Myc和 11R-Oct4、11R-Sox2、11R-Klf4 2种组合分别将小鼠成纤维细胞重编程为iPS细胞。
· 蛋白质转染诱导ips细胞
· 细胞膜的通透性观察实验

 

3、【化学药物诱导技术】

体细胞重编程效率低且动力学缓慢(2~3 周),极大制约iPS 细胞研究与应用 化学物质可以提高重编程效率,并且能功能性替代某些转录因子,其主要通过影响细胞表观遗传修饰和信号转导通路发挥作用。

3.1 表观遗传途径
表观遗传修饰在体细胞重编程 程中有着重要作用,化学小分子改变体细胞的DNA甲基化、组蛋白修饰(乙酰化、甲基化和磷酸化等)等表观遗传特性提高重编程效率。
· 亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化
· RNA干扰(转录后基因沉默)实验

3.2 信号通路途径
研究表明 ,化学小分子可通过调节细胞信号通路提高体细胞重编程效率,如激活Wnt等信号通路和抑制MEK-ERK1/2、GSK 和TGF-B等信号通路均提高重编程效率。
· TGF-f3/Smad信号通路相关蛋白表达
· PI3K/Akt/mTOR信号通路研究方法
· Wnt/β-catenin信号通路相关研究

 


近十年诺贝尔生理或医学奖的相关实验汇总
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