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主要实验材料:
带GFP的细胞(同时应有不带GFP的细胞作为对照)、0.01M PBS、2%多聚甲醛溶液(PBS稀释)、70%乙醇、50ug/ml PI溶液(PBS稀释)、100ug/ml RNase、流式管、涡旋仪、37度水浴锅、冰盒
实验步骤:
1、计数细胞,取2X106个细胞,用PBS洗涤细胞(300g离心5分钟弃上清);
2、用500ul 预冷的PBS重悬细胞,加入500ul 2%多聚甲醛溶液,混匀后放置在冰盒中20分钟(注意不要超过1小时,低浓度的多聚甲醛以及更短时间的固定能保留较多的GFP荧光信号);
3、300g离心5分钟弃上清,加入2mL PBS重悬细胞,300g离心5分钟后弃上清,加入1ml 70%乙醇(将细胞管在涡旋仪上轻轻振荡,逐滴加入70%乙醇),迅速混匀后可放置四度固定破膜过夜;
4、300g离心5分钟充分弃去乙醇(用移液器吸去乙醇),加入1ml终浓度为50ug/ml PI以及100ug/ml RNase的染色液,混匀后37度避光孵育30分钟;
5、放置在冰盒中尽快用流式细胞仪获取检测(如有絮状物,建议用200目尼龙网过滤后再上机)
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GMT+8, 2024-6-14 05:29
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