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在动植物转录组研究当中,非编码RNA例如lncRNA、miRNA已被大量报道及研究,虽然原核非编码RNA偶有被发现,但随着原核转录测序技术的发展,细菌转录组中的sRNA才逐渐被认识并慢慢成为原核转录组的研究热点。
什么是细菌sRNA?
细菌sRNA一般来源于基因间区,部分通过mRNA的3’UTR剪切形成。它们长度一般为50-500bp,但实际上很多物种的sRNA长度在100-300bp左右。一个正常细菌细胞含有大约100-200个sRNA,每个sRNA同时又具有多个靶基因,因此sRNA与mRNA在细胞内部形成一个复杂的调控网络。
细菌sRNA本身没有功能,大部分都通过碱基配对的方式与靶基因结合,起到一定调控作用。与miRNA不同,sRNA具有多种调控功能,包括调节转录本稳定性、激活/抑制蛋白表达等。现阶段已有多个研究表明,细菌sRNA能够调控多种毒力因子,参与细胞的抗逆反应、碳以及氨基酸代谢等。
sRNA的调控作用
如何检测sRNA?
细菌sRNA与真核生物的miRNA等小RNA很类似,但由于miRNA长度一般为20多bp,SE50的测序策略已经满足研究需求。而前面已经提到过,细菌sRNA长度一般为50-500bp,在建库和测序策略的选择上更为自由,哪怕一般的原核350bp左右的建库方式都可以检测到不少sRNA。
不过一般经验而言,细菌sRNA的长度峰值在150-300bp左右,因此从性价比考虑,我们完全可以建立一个200bp的链特异性原核转录组文库,采用PE100等策略,满足大部分sRNA的检测需求的同时,也可以开展原核mRNA研究。
sRNA靶基因预测
要了解sRNA的作用,对其靶基因进行预测是必不可少的一个环节。sRNA虽然能够通过碱基匹配方式与靶基因结合,但实际上很多sRNA由于长度的限制,只有部分与靶基因相结合,再加上匹配方式很多是不完全匹配,因此会造成sRNA的靶基因预测存在很大假阳性。实际上,sRNA最常见是结合在mRNA的5UTR区域,因此利用CopraRNA、IntaRNA、TargetRNA和RNApredator等软件,在转录本的-200到+100区域进行预测,一般能收到不错的效果。
怎么分析?
对于sRNA的研究,网络上已经有很多在线分析工具,但它们的功能都相对单一,分析不够系统。针对sRNA的研究特定,我们提供sRNA预测,长度统计等基础分析,同时也开展srna二级结构预测,靶基因预测等多个核心分析内容,以最大限度满足大部分的科研需求。对致病菌的发病机制、细菌的环境应答机制有所关心的老师,可以考虑开展sRNA的相关研究,具体的研究思路,可以参考往期微信文章《》。
sRNA分析结果展示
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