IOX2 结构式

IOX2是一种有效的HIF-1α prolyl hydroxylase-2 (PHD2)抑制剂，无细胞试验中IC50为21 nM，比作用于JMJD2A，JMJD2C，JMJD2E，JMJD3和2OG氧合酶FIH选择性高100倍以上。

靶点      PHD2 [1]

体外研究：IOX2有效抑制PHD2 (IC50为21 nM)，比抑制JMJD2A, JMJD2C, JMJD2E, JMJD3, 或2OG加氧酶FIH(IC50<100 μM)选择性高100多倍。IOX2有效作用于细胞，50 μM时，作用于RCC4细胞，抑制HIF-1α羟化。[1] 缺氧诱导因子（HIF）通过在HIF-1α亚单位，由脯氨酰残基在氧依赖性降解结构域的羟化调节。1,2 HIF 脯氨酰羟基化是由脯氨酰羟化酶结构域酶(PHD1, 2, 和 3), Fe(II) 和 2-酮戊二酸 (2OG) 加氧酶家族成员催化。他们需要分子氧作为辅助底物，从而充当HIF系统的缺氧敏感元件。缺氧抑制PHD活性，增加HIF转录复合物的丰度和活性。[2]

Alpha 筛选实验：所有试剂在补充0.01 % Tween20的50 mM HEPES, 0.1 % BSA, pH 7.5 中稀释，在室温下使其平衡，然后加入到实验板中。催化转换实验在在低体积384孔板中在室温下进行。反应包含(0.5-25nM), b生物素化的底物肽(30-1000 nM), Fe(II) (1-10 μM), Ascorbate (100 μM), 2OG (5-40 μM) ，在室温下反应。使用EDTA终止反应 (5 μM) ，AlphaScreen 供体(Streptavidin-共轭) 受体 (蛋白 A-共轭) 珠粒与加入的肽产物抗体 (5 μM)温育。实验板用箔密封，避光，室温下温育60分钟，在PHERAstar FS酶标仪上，使用AlphaScreen 680激发波长/570发射波长滤器装置读数。珠粒的最终浓度为20 μM/mL。使用Prism 5计算IC50值。

[1] Murray JK, et al. J Comb Chem, 2010, 12(5), 676-686.

[2] Tian YM, et al. J Biol Chem, 2011, 286(15), 13041-13051.