肉毒毒素(Botulinum neurotoxin，简称BoNT)是已知毒素中最毒的一种物质。BoNT被分为7种血清型，分别标记为BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F以及BoNT/G。在每一种血清型中，研究人员根据其氨基酸的变化性和具有较小氨基酸序列差异的变体又可以分为若干亚型。BoNT亚型的鉴定对于追踪细菌病原体具有重要意义。一个新的方式来分析致命的蛋白质肉毒毒素，使得它有可能区分其众多亚型,其中许多相差只有少数氨基酸(Dongxia Wang, Jakub Baudys, Jon C Rees, Kristin M Marshall, Suzanne Ramirez Kalb, Bryan A Parks, Louis Nowaczyk II, James L. Pirkle, and John Robert Barr. Subtyping Botulinum Neurotoxins by Sequential Multiple Endoproteases In-gel Digestion Coupled with Mass Spectrometry. Anal. Chem., Publication Date (Web): May 11, 2012，DOI:10.1021/ac3006439 )。

肉毒杆菌毒素引发瘫痪,被认为是一种潜在的生物恐怖主义试剂。该毒素不仅有7种血清型，而且这些血清型自身又含有许多亚型和变种。依据聚合酶链反应方法可以识别毒素亚型,但他们需要从产毒生物体的DNA,包括肉毒梭菌。在许多情况下,只有毒素本身是可用的。通过扩展传统的分析方法,包括用酶消化大型蛋白质，然后通过质谱测肽序,美国疾病防控中心（Centers for Disease Control & Prevention）的研究化学家John R. Barr和他的同事可以得到相应的结果。传统的方法效率低,是因为消化不完全,所以经常不能产生足够的肽来生成一个彻底的序列识别。相反,John R. Barr研究小组采用多酶和序贯凝胶消化（multiple enzymes and sequential in-gel digestion，简称MESID）法表征BoNT蛋白质序列，使受污染的胡萝卜汁中一种肉毒毒素的蛋白质序列98%以上可以精确测定。该方法可以推广应用于其他重要的蛋白质毒素的鉴定或识别。

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