科研检测中使用参照系经常出现的几个问题

蒋继平

2016年11月27日

一个已经成熟的科研检测程序，必定有一个可靠的正负参照系。这个正负参照单元是用来判定被检测的物体的反应的。比如说，在用酶标反应来检测病毒的试验中，必须要有一个阳性病元作为正对照，一个只有蒸馏水或者用于制备这个酶标反应的缓冲溶液作为负对照，也称为空白对照。又如，在一个植物抗病性能检测中，必须具有一个已知的抗性品种作为正对照，一个没有这种抗性的品种作为负对照。这种没有抗性的品种称为感病品种。

在实际操作时，我们经常会遇到如下的一些问题。

• 正对照没有达到预期的要求。比如说，在酶标反应中的正对照没有达到标准试验中的分辨率，或者正对照没有出现应有的反应。在这种处境下，检测实验是失败的。导致失败的原因可能有几种。最主要的可能是：1。用于正对照的病原质量出了问题，2。制备实验用的试剂被污染，3。环境条件没有达到实验的要求。在植物抗性鉴定的实验中，抗性品种出现不该有的死亡和病症。抗性品种出现的问题可能是土壤或者水源被其他有害微生物污染。

• 空白对照出现了不该有的反应。在酶标检测中，假如空白对照出现不该有的反应，那么很可能是在配置试剂时交叉感染了。在这种情况下，检测不能算作成功的。在植物抗性鉴定的实验中，最常见的是感病品种没有100%出现感病的性状，感病品种出现的问题可能是环境条件不适合这种病害的发生。这个环境条件包括温度，湿度，病原菌的剂量和致病力以及接种时的人为误差。在这种情况下，只要感病对照的绝大部分出现病症，也可以算作成功的检测。不过，这个需要非常熟练的专业知识和实际工作经验。

• 正负对照出现了相反的结果。这种情况很少发生。比如说，在植物抗性检测中，抗性品种出现全部死亡，而感病品种全部正常生长。这种现象与标准实验的结果正好相反。出现这样的情况，完全是人为的失误，是在标记时弄错了。这种低级错误对于一个专业人士来说，可以立即发现并且及时纠正。在这样的处境下，实验检测的结果还是有效的

• 缺少正对照。前不久，我接到国内一个研究人员发来的报告，他做的是植物抗性检测。他说他的实验中没有抗性正对照，感病的对照绝大多数已经死亡。他问我实验是否算作成功。我给他的答复是：在正常情况下，实验应该算是成功的。不过，在严格的科学定义下，这个实验是不符合规范的。因为我们无法知道导致感病品种死亡的真正原因是什么因子。要是有针对特定病菌的抗性对照品种做参考，而这个抗性品种能够正常地生长，那么我们就可以断定导致这个感病品种生病的就是接种用的致病菌。所以，一个严格的科学检测，一定要有正对照，没有正对照的检测是没有说服力的。