Substrate Engineering Enabling Fluorescence Droplet Entrapment for IVC-FACS-Based Ultrahigh-Throughput Screening

底物工程可实现荧光液滴截留，用于基于 IVC-FACS 的超高通量筛选

来源：ANALYTICAL CHEMISTRY

IF：4.961

摘要：基于体外区室化的荧光激活细胞分选（IVC-FACS）是用于酶定向进化的强大筛选工具。然而，IVC-FACS的效率受到荧光报告基因从液滴中扩散出来的趋势的限制，这解耦了靶基因的基因型和表型。本文提出了一种称为荧光液滴捕获（FDE）的新策略来解决这个问题。底物的极性设计使其能够通过油相，与酶反应并产生不透油的荧光产物，该产物仍被困在液滴内。使用两种不同的底物工程策略设计了几种FDE底物，用于检测磷酸三酯酶、羧基酯酶和糖苷酶活性。从大量过量的非活性细胞中富集稀有磷酸三酯酶活性细胞的模型筛选测定表明，使用FDE底物可实现的富集效率高达900倍：这是此类IVC-FACS系统中报道的最高效率。因此，FDE提供了一种严格控制酶促反应开始，最大限度地减少液滴串扰并降低背景荧光的方法。因此，它可以作为IVC-FACS筛选酶，抗体和其他蛋白质的有用策略。