Flexibility Regulation of Loops Surrounding the Tunnel Entrance in Cytochrome P450 Enhanced Substrate Access Substantially

对细胞色素P450通道入口周围loop的灵活性调节增强底物通道

来源：ACS Catalysis

IF：13.7

摘要:近年来，通过灵活的loop工程改造来改善酶的特性，在生物催化领域得到了关注。在此，我们报告了一种提高底物通道稳定性的loop工程策略，它揭示了loop和通道之间的分子机制。基于CYP116B3的动态隧道分析，我们选择了loopB-B'和B'-C中可能影响隧道频繁发生的五个位置（A86, T91, M108, A109, T111），并同时进行了饱和诱变。通过筛选，确定了最佳突变体8G8（A86T/T91L/M108N/A109M/T111A）用于7-乙氧基香豆素的脱烷基和萘的羟基化，活性大大增加（134倍和9倍）。分子动力学模拟表明，loopB-B'和B'-C的灵活性降低是提高底物通道稳定性的原因。围绕隧道入口的loopB-B'和B'-C的重新设计为loop工程提供了一个强大的、通用的方法来启动/关闭底物/运输。