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RT-PCR引物设计: primer-blast + primer premier
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第1步：
网页工具：
primer-blast
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/
将 mRNA 编号（ NM*********** ）输入序列框中， real time PCR 一般产物长度为 80 ～150bp 也可以超一点，但是会影响扩增效率，这样就不能用 ddCT 法计算了，酌情考虑。温度在 55～ 63 和 GC 含量在 40% ～60% ，两条链不要差太远。跨内含子。
第2步：
网页版设计好的引物，再通过primer premier 6.0检验一下！
软件下载：
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primer premier 6.0破解版：
链接：https://pan.baidu.com/s/1yE7cJc57JFNQ_POtSq1hVQ
提取码：r4ey
https://blog.sciencenet.cn/blog-1509670-1176297.html
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