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07级RNA提取---细节决定成败

已有 4036 次阅读 2009-11-15 10:09 |个人分类:未分类|系统分类:教学心得

生物工程系












生物技术系













教学体会:

1.整个过程中,既要小心缓慢混匀,又要充分混匀.比如第一次有机溶剂抽提,在只加酚时,如果过分小心而不混匀,作用不充分,离心后酚相会在上层.如果按照讲义加了120微升氯仿,就能分层.生工的一些同学就是因为第一次处理不好,又加了氯仿重新处理,所以有DNA污染.而生技注意了这个问题,一次成功.

2.第一步酚处理时还是加120微升氯仿比较保险.

3.第一次有机溶剂与水相分离时上清液取量很重要.讲义上写的500微升是从720微升中吸取.经过实验,从720微升中取400微升比较保险.实验中分离情况不同,要根据具体上清液的量按比例取.不能死搬500微升这个数值.关键是避开靠近酚相的DNA.

 4.CTAB作用的时间也很重要.一般加热10分钟就够了.时间长更多的膜系统解离,游离DNA和RNA都增加.所以DNA污染的机会增加,同时RNA的种类和丰度也增加.



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