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- [转载]利用Taqman-MGB探针进行SNP分型
- 单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs），指由于单个核苷酸碱基的改变而导致的核酸序列的多态性。在不同个体的同一条染色体或同一位点的核苷酸序列中，绝大多数核苷酸序列一致而只有一个碱基不同的现象，这就是SNP。 由于SNP在人类基因组中数量较多，发生频率较高，大约平均每1000个碱基中就有一个多态 ...
- LNA（Locked Nucleic Acid）碱基修饰技术
- 锁核酸（LNA）是一种含有桥接双环糖基（bridged, bicyclic sugar moiety）的合成核酸类似物。 在2'-O-和4'-位之间添加的亚甲基基团将呋喃核糖环“锁定”为3'-内构象（3'-endo conformation）。这种构象形成了A型RNA的特征结构。由于这种双环糖骨架的限制，LNA只会形成A型双链体。此外，LNA完全遵守Wa ...
- UNG酶+dUTP方法防止PCR污染的原理
- 为保证PCR结果的准确性，要预防非特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG酶(Uracil-N-Glycosylase， 尿嘧啶 -N- 糖基化酶 )+dUTP的防污染热启动PCR试剂盒（试剂盒以dUTP代替dTTP，所以PCR产物都是含有dU的“DNA”链）。 在PCR开始前有一步保温步骤，此时UNG酶可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的尿 ...
- [转载]Taqman探针的设计及荧光基团的选择
- 一、实时荧光Taqman 探针设计 总原则：探针选择要保守，引物选择要保守，因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。即real-time PCR的扩增片段是50bp-150bp。当找不到150bp的保守片段时，必须确保探针的片段是保守的。 在设计探针和引物时，要同时考虑在两条链上设计引物与探针。但要注意的是，在哪 ...
- 引物设计原则
- ①引物长度一般为15-27 bp，最适为 18-22 bp （注意此处所指的长度是结合到模板的长度，不包括5'端加修饰后的长度）， 过长会导致延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。上下游引物长度差不超过4 bp，Tm差不超过2℃。 ②引物序列在模板其他位置应当没有相似性较高的序列， ...
- [转载]定量PCR Taqman探针设计要领
- 自90年代 Taqman 探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）不断有新的技术出现，但是作为一种经典的定量 PCR 技术， Taqman 探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选，这主要是因为相对于 SYBR 荧光染料， Taqman 探针具有序列特异性，只结合到互补区，而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系，因此特异性强 ...
- [转载]双酶切和同源重组法构建载体
- 基因克隆是分子生物学中的一种基本的操作方法。通过双酶切来构建载体是其中常用的一种方法，这种方法利用限制性内切酶可以识别并切割特定的核苷酸的原理，用两种不同的限制性内切酶切割靶基因得到前后都带有粘性末端的靶基因片段，与同样经两种限制性内切酶切割得到的带有相同粘性末端的线性载体在T4 DNA连接酶作用下进行 ...
- [转载]鸡的免疫系统简介
- 鸡的免疫系统分为非特异性免疫系统和特异性免疫系统。 非特异性免疫系统是指鸡对于疾病先天性的抵抗力，在制定鸡群的保健计划时此防御系统往往被忽视，很多保健计划都是依赖于疫苗和抗生素来维持鸡群健康。我们必须认识到非特异性免疫系统的重要性。遗传因素是非特异性免疫的一种——对于很多病原微生物，鸟类由于没有相 ...
- [转载]鸡蛋的产生过程
- 蛋黄如何一步步变成了鸡蛋？ 从蛋鸡排卵到最终产蛋，一个鸡蛋的形成时间需要24-28小时。 蛋鸡的生殖系统称为输卵管，包括卵巢、漏斗部、膨大部、峡部、子宫、泄殖腔。大多物种的雌性动物具有左右两条输卵管，但鸟类只发育了左边那条，长约2英尺（60厘米）。 卵巢 卵 ...
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