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裂谷热病毒:一群来自现代智人故乡的幽灵(三)

已有 985 次阅读 2019-11-12 17:11 |个人分类:RNA病毒的世界|系统分类:观点评述

裂谷热病毒:一群来自现代智人故乡的幽灵(三)


四、实验室诊断


一些其它种类的病毒或细菌感染人和动物,也能产生与RVF相似的症状,因此临床上一般很难确诊。

在非洲的热带地区,一般情况下,RVF流行前都有罕见暴雨和洪水,伴随着大量蚊虫滋生,如果反刍类家畜突发大规模流产和幼畜死亡现象,就可以高度怀疑RVF的暴发流行。

但确诊还需要实验室诊断,目前已经发展出多种较为完善的实验室诊断方法,这些方法各有优缺点,应用时应该根据具体情况,采取综合互补的诊断策略,这样就能在疾病发生的不同时期都能够做出准确的诊断。

(一)病毒分离

急性发热期的血清或全血,新鲜动物尸体或流产胎儿的肝、脾、脑等都可以作为分离病毒的标本。可以用传代细胞VeroBHK-21C6/36等进行分离,也可以用幼鼠、成年小鼠或仓鼠等试验动物进行分离。

病毒分离培养有较高的生物安全要求,需要在生物安全3级实验室(BSL-3)内开展。

病毒分离是RVF感染诊断的金标准,但所需时间长,对试验实施和人员素质要求较高,不适合快速诊断要求。

(二)抗原检测

人和动物感染都会产生高滴度的病毒血症,但持续的时间较短,因此抗原检测的窗口期较短

抗原检测的方法主要包括琼脂凝胶免疫扩散试验、免疫荧光试验和ELISA等。特别是改进的夹心ELISA 法,用重组N蛋白包被,检测血清中N蛋白,该方法特异性高,操作简便安全。

(三)抗体检测

感染RVFV的人和动物在病毒血症消失后不久就有抗体产生。一般情况下,患者发病5d后出现IgM抗体,可持续2-3个月。通过检测双份血清阳转和4倍或4倍以上抗体增长,或者检测IgM,都可以作为近期感染的实验室依据。

常用的检测抗体的血清学方法主要有中和试验、ELISA、血凝抑制试验和补体固定试验等。这些血清学方法在流行病学调查中也有广泛应用。

中和试验是国际贸易中规定的抗体检测的金标准,包括微量中和试验、蚀斑减少中和试验和小鼠中和试验。中和试验有很高的特异性和敏感性,但操作需要活病毒,对实验室的生物安全要求高,非疫区国家和地区不推荐使用。

传统的ELISA试验所需的抗原是灭活的病毒培养物,可以特异性的检测IgMIgG和总抗体,由于使用的是灭活抗原,因此可以在RVFV不流行的地区使用,成为疾病监测、进出口兽医签证和疫苗效果评价的常用方法。

(四)核酸检测

基于核酸的分子诊断技术具有快速、敏感、特异等优点,可以用于出现病毒血症的早期诊断。由于病毒血症时间短,应用核酸分子检测技术时需要与血清学方法结合使用。

目前运用普遍的是实时荧光定量PCR技术,理论上5-10RNA拷贝即可检出。

此外,对临床标本中或分离病毒的基因片段进行测序分析,可以进一步了解病毒的某些分子遗传特性,为病毒溯源提供重要的分子流行病学依据。




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