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比较荧光实时PCR和arm-PCR的定量能力

已有 16571 次阅读 2011-1-27 01:41 |个人分类:多重PCR技术|系统分类:科研笔记| 多重PCR, 生物技术 创新 创业

许多先前在荧光定量PCR技术平台上开发产品的人都有一个根深蒂固的概念:实时PCR可以定量,而普通传统PCR是不能定量的。这个连接有比较详细的讲解。这个概念的产生是有道理的,请看下面大家都很熟悉的图:

不同模板浓度会得到不同的曲线,可是等反应到最后,大家都会达到一个共同的Plateau (平台)。因为传统PCR都是end point analysis (等反应结束了再去分析)所以根本不能区分出标本里面模板的原始浓度。

可是这个图所适用的范畴是一个反应体系,一个靶点。当做多重PCR的时候,情况就不同了:


做多重PCR的时候,整个反应体系的扩增可以用图中的红线表示。而红线所代表的是每个特定模板(不同颜色曲线)扩增产物的总合。所以,即使是到了反应的终端(Z,end point)红线所代表的任然是不同产物的总合。

arm-PCR的一个特点就是整个反应体系在指数增长期所用的是共用引物,所以所有模板的扩增效率都是一样的。所以即使是终端分析,仍可以得到半定量的结果(不同模板之间的相互比值)。

所以,荧光实时PCR所追求的是反应体系内模板的绝对定量(拷贝数);而arm-PCR所得到的却是反应体系内各个模板的相对定量,或者说是半定量。

不论如何,不能因为大家都说“传统PCR不能定量”就把非荧光实时PCR (如arm-PCR)的定量能力全盘否决了。不要人云亦云,要自己多想想,做出自己独立的判断。



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