中国2004年至2018年的动物狂犬病监测（2）

Animal Rabies Surveillance, China, 2004–2018

在美国CDC于今年12月出版的专业杂志《Emerg Infect Dis.（新发传染病）》上，发表了军事医学科学院军事兽医研究所（中国长春）涂长春研究员等的这篇研究论文，提供了迄今为止最全面的中国RABV（狂犬病毒）感染动物的种类、地理分布、传播源和遗传多样性的数据集。现将该论文的主要内容进行摘译，此次发布的是第二部分：

方法

狂犬病毒标本采集、检测

自2004年起，中国农业和农村事务部开始实施狂犬病监测计划，重点关注流浪猫狗，特别是有咬人等异常行为的猫狗。该计划还要求监测家畜和野生动物中疑似爆发狂犬病的情况。2004年至2018年，共提交了185只疑似患狂犬病动物(死狗、行为异常或咬人的狗、有类似狂犬病临床症状的牲畜、死狐狸、死狼、死貉)的脑组织（见附录表1）。此外,作为主动监测，共收集了10,118个脑组织，来自三种类型的看似健康的狗,大部分来自狂犬病流行的农村地区：1.流浪和无主的狗、2.用于肉类消费而屠宰的狗,3.在紧急情况下(在爆发狂犬病的疫区为预防进一步传播）杀死的狗。所有标本由各地区的动物疾病预防和控制中心收集并提交给参考实验室。

脑组织采用直接荧光抗体测试(FAT)法进行检测，使用FITC标记的抗狂犬病单克隆抗体(13)。为获得完整的N基因的编码序列,狂犬病阳性标本的RNA提取使用 TRIzol 试剂盒,随后进行逆转录PCR(6)。

基因测序和系统发生（Phylogenetic）分析

采用已商业化的Sanger法进行N基因扩增和测序，并提交给GenBank(登录号见附录表3)。对从GenBank检索获得的这些序列和其他代表性序列执行完整的N基因系统发生分析,覆盖的样品范围是从1940年代到2018年在中国和周边国家所收集到的(附录表3)。用MEGA 7程序包来构建系统发生树......。使用Figtree 1.4.2版本(http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtreeExternal Link)对树进行可视化。

为对中国不同RABV系统群（phylogroups）的流行程度进行排序，分析其在中国的传播趋势，我们检索了GenBank中所有中国RABV株系的序列。在去除重复序列和没有明确时间信息的序列后，我们将剩余的序列与本研究中获得的序列按照前面所述的步骤进行系统分类，并按采集日期进行时间排序。

时空进化分析

（主要涉及相关的专业性计算机软件的应用，具体内容略）

......基于这些分析，对每个RABV分支（clade）的核苷酸取代率和到最近共同祖先的时间(time to most recent common ancestor，tMRCA)进行了估计。......

结果

1. 中国动物狂犬病疫情现状

2004年至2018年，从17个省区收集到185只疑似狂犬病动物的脑组织，提交本实验室;其中144个样品(77.8%)经FAT检测狂犬病毒阳性(附录表1),在样品为阳性的物种中,狗是主要受感染动物,占总病例的68.8%(99/144),其次是牛(12.5%)、羊(9.7%)、骆驼(4.2%)、狐狸(2.1%)、猪(1.4%)、貉(0.7%)和驴(0.7%)(附录表1)。同时，在对来自中国7个省区的健康犬的10,118份脑组织样本的主动监测中，发现33份(0.33%)为FAT阳性。33份阳性标本中，31份来自无主的狗(包括流浪狗)，2份来自在紧急情况下所杀的狗(附录表2)。在2013年－2018年报告的家畜狂犬病共29个病例包括牛、羊、骆驼，它们来自内蒙古和新疆, 都是源于狐狸咬伤(附录表1)。

英文原文：

Feng Y, Wang Y, Xu W, Tu Z, Liu T, Huo M, et al. Animal Rabies Surveillance, China, 2004–2018.  Emerg Infect Dis. 2020;26(12):2825-2834. https://dx.doi.org/10.3201/eid2612.200303 

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