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[转载]自噬检测方法

已有 10159 次阅读 2019-3-7 17:12 |系统分类:科研笔记|文章来源:转载

1.检测LC3II/LCI: lc3参与自噬的形成,自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),LC3II升高代表自噬的启动;


2.检测P62:P62可以通过自噬来降解,因此P62可以反映自噬的强弱。当LC3 II升高,P62同时降低,表明自噬流通畅;如果LC3II 升高,P62升高,表明自噬起始正常,但下游不通,吞噬体和溶酶体不能融合。


3.除此之外,当自噬减退,如何鉴别其发生在自噬形成阶段OR自噬降解障碍呢?
可以通过RFP-GFP-LC3双标腺病毒检测。GFP在酸性环境中降解,红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体。如吞噬体和溶酶体能正常融合,那么红色荧光多于黄色荧光,如自噬下游阻滞,吞噬体和溶酶体不能正常融合,则主要为黄色荧光。



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