科研笔记分享 http://blog.sciencenet.cn/u/shixiuchao 正着手研究运动对心血管影响,欢迎参与交流,欢迎批评指正。

博文

Masson 染色实验方案

已有 15582 次阅读 2015-8-2 13:46 |系统分类:科研笔记

Masson染色


一、实验目的

显示病变组织纤维化程度。

二、实验原理                              

Masson染色使胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色(被亮绿所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染,肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。I型、III型胶原呈绿色(GBMTBM、系膜基质及肾间质呈绿色),嗜复红蛋白、肾小管胞质、红细胞呈红色。

三、实验材料和试剂:                        

(一)Weigert氏铁苏木素液(可用Harris苏木素代替)

甲液:

苏木素1g

无水酒精(或 95%酒精) 100ml

乙液:

30%三氯化铁水溶液 4ml

蒸馏水 95ml 30%三氯化铁溶液则为100ml

盐酸 1ml

临用时,取甲、乙液等量混合即可使用。混合时应将乙液加人甲液内,染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用,因铁与染色剂的色素化合生成不溶性沉淀,所以铁作媒染液时,必须与染液分别配制和分别保存,染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素,它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用,且不会被光线褪色,因此比钾矾苏木素染色较为持久。

(二)丽春红酸性品红液

丽春红 SPonceau S0.7g

酸性品红(acid fuchsin0.3g

蒸馏水 99ml

冰醋酸(glacial acetic acid)1ml

(三) 1%磷钼酸水溶液

磷钼酸(phosphomolybdic acid1g

蒸馏水加至 100ml

(四) 2%苯胺蓝液

苯胺蓝(aniline blue2g

冰醋酸(glacial acetic acid 2ml

蒸馏水   98ml

(五)1%冰醋酸

冰醋酸  1mlL

蒸馏水99ml

(六)1%亮绿液

亮绿(light green1g

蒸馏水 99ml

冰醋酸(glacial acetic acid 1ml

(七)Bouin’s

苦味酸饱和液(1.22%)75ml

福尔马林25ml

冰醋酸5ml

此液一般在临用时配制,对皮肤及肌腱有软化作用。

四、染色步骤与方法:

1.组织固定于Bouin氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。

2.切片脱蜡至水:

1)二甲苯中脱蜡10min×3次,用吸水纸吸干液体。

2100%乙醇5min×2次,用吸水纸吸干液体。

395%乙醇5min×2次,用吸水纸吸干液体。

4)流水2min,用吸水纸吸干水分。

3Weiger氏铁苏木素染5-10min

4.流水稍洗。

5 0.5%盐酸酒精分化。15s

6.流水冲洗3min

7.丽春红酸性品红液染8min

8.蒸馏水稍冲洗。

9 1%磷钼酸水溶液处理约5min

10.不用水洗,直接用苯胺蓝液或亮绿液复染5min

111%冰醋酸处理1min

1295%乙醇脱水5min×2次,用吸水纸吸干液体。

13100%乙醇5min×2次,用吸水纸吸干液体。

14.二甲苯中透明5min×2次,用吸水纸吸干液体。

15.中性树胶封片。

结果:胶原纤维呈蓝色(用苯胶蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞红色。胞核蓝褐色。

注意事项:

1、组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

2、铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法)

3、如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1来配制。

4、用1%磷钼酸处理时可在镜下控制,见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。

5、苯胺蓝或亮绿不能过染,防止掩盖红色。

6、磷钼酸使绿色和蓝色鲜艳,磷钨酸增加红色。

 




http://blog.sciencenet.cn/blog-468039-910015.html

上一篇:我的英语词库
下一篇:HE染色实验方案

0

该博文允许注册用户评论 请点击登录 评论 (0 个评论)

数据加载中...

Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )

GMT+8, 2021-10-19 21:13

Powered by ScienceNet.cn

Copyright © 2007- 中国科学报社

返回顶部