博文

肿瘤细胞培养——HT-29人结肠癌细胞传代-消化示意图

已有 17872 次阅读 2012-4-19 21:01 |个人分类:科研经验|系统分类:科研笔记| 肿瘤, 示意图, 结肠癌

这篇文章作为《肿瘤细胞培养实验过程中经验总结》的后续，着重介绍我在细胞传代的过程中细胞消化的详细图解过程，另外，此篇文章也是作为前一篇文章中问题的解答，我也是新手，很多东西都是自己慢慢摸索得到的，现与大家分享之，欢迎大家就肿瘤细胞——HT-29人结肠癌细胞的培养进行交流。

HT-29人结肠癌细胞是一种贴壁细胞，贴壁细胞在培养瓶中长成致密单层后，细胞生长空间不足，细胞代谢产物积累较多，且培养基中的营养物质消耗增多，需要对细胞进行分瓶。

一般分瓶的过程包括以下几个步骤：

（1）将长成致密单层的细胞（一般铺满瓶壁70%左右）的细胞培养瓶中的培养液倒掉；

（2）用D-hanks洗2-3次，尽量洗尽培养基，以免中和加入的消化液，使强度减弱；

（3）视自己细胞状态，加入0.25%的胰酶和EDTA的混合液5-8滴，（详细解释见http://blog.sciencenet.cn/home.php?mod=space&uid=459863&do=blog&id=555270 可以用GIBCO公司的0.25%Trypsin-EDTA试剂，也可以自己配制），消化一定的时间（自己掌握），在显微镜下观察细胞消化状态；

（4）加入2mL培养液终止消化，用吸管轻轻吹打，使细胞从瓶壁上脱落下来，置于离心管中离心，弃去上清液，沉淀加入适量的培养基进行吹打，使细胞尽量分散开来，然后进行冻存或分瓶传代，一般一分三为宜。

下面将细胞在消化过程中的光学显微照片列出以供参考：

致密单层细胞在培养瓶上成雾状，看上去有颗粒感，半透明状态。

加入0.25%胰酶和EDTA混合液后，立即在显微镜下观察，细胞仍然呈致密单层状态。

细胞开始皱缩，但是不太明显，细胞仍然维持正常的状态。

细胞明显皱缩变小，细胞间隙增大不再致密，部分细胞维持正常形态，部分细胞皱缩变圆。

细胞明显分散开来，从培养瓶壁脱落下来，并且从聚集状态分散成颗粒状。

细胞完全分散开来，皱缩变圆，并且分散成颗粒状，消化完成，此时可以加入培养液终止消化，用吸管使细胞从瓶壁上吹洗下来，离心，加入培养液后，吹散进行冻存或传代。