收藏版：梅毒检测方法及意义

        直接法检测梅毒        01 暗视野显微镜法 (DFM)  DFM 可直接观察病灶分泌物中的梅毒螺旋体，是诊断早期梅毒的有效方法，但 DFM 敏感性常较低，且由于梅毒螺旋体形态与常分布于口腔、直肠部位的齿垢密螺旋体、屈折密螺旋体和蚀疮溃疡密螺旋体等非常相似，不易区分，因此不适用口腔、直肠病灶部位样本。  02 直接免疫荧光试验 (DFA)   DFA 较之暗视野显微观察阳性率有所提高，且还可以对病理组织切片进行检查，但该法对实验人员的技术要求较高，目前还没有在实验室广泛使用。03 动聚焦显微镜 (FFM)   FFM 的原理是通过移动显微镜的聚焦，对组织进行三维立体扫描，从而能检测到极微量的螺旋体，尤其是对极难诊断的二期和三期梅毒分别达到了 97% 和 87% 的检出率。但是，FFM 的使用并不普及，仪器也比较昂贵，因此，此方法适合最后的确证性检测，尤其适用于三期梅毒检测。

        血清学试验检测梅毒        01 非梅毒螺旋体血清学试验   非梅毒螺旋体血清学试验包括性病研究实验室试验 (VDRL)、不加热血清反应素试验 (USR)、快速血浆反应素纸片试验 (RPR)、甲苯胺红不加热试验 (TRUST)。主要的临床意义有：1）RPR 和 TRUST 为 VDRL 试验的改良版，其中 TRUST 法最为简便快速且检测结果较好，阳性检出率最高可达 85%。2）RPR 和 TRUST 这两种方法临床上使用比较广泛，目前常作为梅毒的筛选、梅毒患者治疗后滴度的检测及疗效观察。3）据文献报道，VDRL 是主要用于检测脑脊液反应素的试验，对神经梅毒的诊断具有重要价值。4）上述非梅毒螺旋体血清学试验多用于检测非特异性抗体，非特异性抗体的出现时间多晚于梅毒螺旋体特异性抗体，一般为硬下疳出现 4 周后方能具有较好的诊断效能，因此不利于早期梅毒的鉴别诊断，非常容易出现假阴性而导致漏诊。5）上述方法容易出现生物学假阳性反应，如免疫系统性疾病、感染性疾病、风疹、肺炎、肿瘤或孕妇合并妊娠反应等都会引起该类试验的假阳性反应。但出现假阳性反应的抗体滴度较低，一般很少超过 1:8，因此出现阳性时，最好结合梅毒螺旋体血清学试验确证，并结合临床表现进行鉴别。        02 梅毒螺旋体血清学试验   1）荧光密螺旋体抗体吸收试验 (FTA-ABS) FTA-ABS 法被认为是梅毒检验的「金标准」，具有特异性高、敏感性强的特点，可作为梅毒的确证试验，但对伴有 HIV 感染的神经梅毒会出现假阳性。2）梅毒螺旋体血凝试验 (TPHA) 和梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) TPHA 与 TPPA 原理基本相似，TPPA 是 TPHA 的改良版，用玫瑰红色的明胶颗粒替换了 TPHA 中使用的红细胞，使结果更易于肉眼观察，两法对各个时期的梅毒检测的敏感性均很高，多用于梅毒筛查阳性结果的确认。有研究显示，TPPA 对一、二、三期梅毒的检出率都较高，但由于梅毒一旦感染，患者机体内会终生伴有抗体的存在。因此，这类方法一般作为梅毒螺旋体既往感染的确诊性试验，不适合用于大规模筛选性检测。3）间接免疫试验 间接免疫试验如酶免疫法（EIA）、梅毒酶联免疫吸附试验 (TP-ELISA)、化学发光分析法 (CLIA) 等，可以通过不同的发光技术来达到信号放大的效果，因此可以大大提高该类方法的梅毒检出率。但是在特异性上，由于该类方法是基于抗原抗体结合的原理，因此更适合二期梅毒的检测，对于一期梅毒的检测效果并不理想。4）胶体金法 胶体金法在鉴别梅毒螺旋体特异性抗体方面选择性较高，且诊断周期短，一般 5~15 min 即可出结果，具有操作简便、可重复性强等优势，适用于基层医疗机构单独筛查或是医疗单位批量进行样本筛检，但胶体金法对特异性梅毒螺旋体抗体浓度过低时会产生假阴性反应，造成漏检。5）免疫组化法 (IHC)  该法依赖于显微镜检查，因此其阳性检出率最高仅能达到 67%。但是将免疫组化和 FFM 联合使用后，可以将检出率大大提高。

        梅毒螺旋体核酸扩增检测技术        目前梅毒螺旋体核酸扩增检测技术（NAAT）主要包括常规 PCR、多重 PCR、实时荧光定量 PCR、反转录 PCR 和巢式 PCR。利用 NAAT 检测 TP 特异性很高（90%~100%），但不同类型临床样本会直接影响核酸检测的敏感性。NAAT 检测梅毒的临床意义：❶ 一二期梅毒以及潜伏期梅毒患者的血液成分（包括全血或血浆血清）进行的 NAAT，敏感性极低，可低至 0，且变化范围较大。❷ NAAT 对孕妇羊水、新生儿血液以及脑脊液的敏感性高，优化后可以作为先天梅毒诊断的重要依据之一。❸ 一期梅毒极早期抗体产生的窗口期、神经梅毒以及先天梅毒的血清学检测结果存在较多不确定的影响因素，可以联合核酸检测来辅助诊断，但应该重点关注样本的选择，以提高对 TP 的检出效率。❹ 研究发现，梅毒螺旋体的 PolyA 基因具有非常高的种间特异性，根据 PolyA 基因序列设计特异的检测引物可以提高检测结果的可信性。有试验证明，使用 PolyA 基因进行常规 PCR 检测方法的敏感性和特异性可达到 95%。但普通 PCR 由于非特异扩增以及扩增条件不佳等问题，并不能保证 100% 的可信性。❺ 巢式 PCR 敏感性和特异性远高于普通 PCR，且对于筛选假阴性样本有重要的作用，但由于操作复杂，只适合作为检测的辅助手段。❻ 实时荧光定量 PCR 虽然有很高的特异性和灵敏度，但其敏感性会受到不同样本的干扰，如果全血中存在抑制 Taq 酶活性的物质，那么其敏感性就会降低，从而影响阳性检出率。实时荧光定量 PCR 对于一期梅毒病人的敏感性要远远高于二期和三期病人。因此，实时荧光定量 PCR 方法更适合于对早期梅毒病人的快速检测。

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