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线粒体膜电位检测细胞凋亡--JC-1流式应用的原理及分析

已有 48641 次阅读 2013-1-24 09:46 |个人分类:流式知识|系统分类:科研笔记| 流式, JC-1, 线粒体膜电位

JC-1 检测线粒体膜电位(Membrane potential)原理:
在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏,这被广泛认为是细胞凋亡过程中最早发生的事件之一。线粒体膜电位的检测有很多方法,JC-1的流式检测是比较常见的一种方法。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态,低浓度时,以单体存在,可检测到绿色荧光,用流式检测时,通常为FL-1通道(和FITC同通道)高浓度时,以多聚体存在,可检测到红光,流式检测通常为FL-2通道(和PE同通道)。因JC-1浓度的变化,在单体和多聚体之间形成一个可逆的转变过程。
正常细胞,膜电位正常时,JC-1通过线粒体膜极性进入线粒体内,并因浓度升高而形成发射红色荧光的多聚体,而凋亡细胞,线粒体跨膜电位去极化,JC-1从线粒体内释放,浓度降低,逆转为发射绿色荧光的单体形式。故而可以通过检测绿色和红色荧光来定性(细胞群的偏移)定量(细胞群的荧光强度)的检测线粒体膜电位的变化。

JC-1 检测线粒体流式数据分析:

1.定性分析
图1:

图片来源:中国流式协会网站论坛
图2:细胞经过药物不同时间点处理后,凋亡细胞逐渐增多,从原先的红光多聚体,慢慢的释放为绿光单体。

图片来源:
Journal of Translational Medicine 2011, 9:45
2.定量分析
图3:


图片来源:
Leukemia(2012) 26, 451-460


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