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《狂犬病疫苗》讲稿 6:狂犬病疫苗:发展历程和制造概要

已有 9255 次阅读 2013-6-28 15:59 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦|关键词:狂犬病,疫苗,讲稿,,有效性| 狂犬病, 疫苗, 有效性, 讲稿

44.6  狂犬病疫苗:发展历程和制造概要

44.6.1  狂犬病疫苗发展历程:从神经组织疫苗(NTV)到细胞培养狂犬病疫苗(CCRV)

狂犬病疫苗已有128年的历史:相继经历了不灭活的NTV(Nerve tissue vaccines)(19世纪80年代)、灭活的NTV(20世纪初)和CCRV(cellculture rabies vaccines(20世纪60年代)等过程(Wu et al. , 2011)

1885年,法国微生物学家巴斯德等人研发了世界上第一种可预防人类狂犬病的疫苗。巴斯德将患狂犬病死去的兔子脊髓抽出后自然干燥,发现自然干燥的时间越长,脊髓的毒性就越小。他将放置了14天的患狂犬病而死的兔子脊髓注射给其他兔子,结果这些兔子随后都能抵御狂犬病毒的攻击,即便再注射含有病毒的唾液,也不会患狂犬病了 (Wiktor,1985)
   在巴斯德开创性的研究之后的七十多年中,只有
神经组织疫苗(NTV)可用。对NTV制备的主要改进由Fermi和Semple作出,他们使用苯酚部分或完全灭活病毒。巴斯德时代,人们就已经认识到含大脑组织的NTV的不良反应。与“巴斯德法则(dogma)”相反,除了疫苗中有髓鞘组织而引起的神经并发症,固定病毒也可能对人类致病;接种NTV可引起高达3‰~8‰的变态反应性脑脊髓炎。之后人们用了75年的时间才证明,免疫后部分患者的瘫痪是由不完全灭活的疫苗株病毒引起。

1956年,Fuenzalida及其同事使用新生小鼠大脑制备无髓鞘疫苗,部分拉丁美洲国家在本世纪初仍在使用这种疫苗。鸭胚疫苗(duck embryo vaccine,DEV)使用在鸭胚中繁殖的病毒制备,大大减少了免疫后不良反应的发生和严重程度,但是DEV的免疫原性比大脑组织疫苗弱。使用小鼠大脑组织疫苗和鸭胚疫苗时,推荐连续进行14—23次免疫接种,但就算是这种“冒险”的剂量也不一定能使严重暴露于狂犬病毒的患者获得免疫保护。因此,人们迫切需要一种具有高免疫原性的狂犬病疫苗,在小剂量应用时也安全、有效,可以用于基础免疫以及暴露后预防。

2004年WHO狂犬病专家磋商会强烈建议应停止使用NTV,替代使用纯化的细胞培养狂犬病疫苗(CCRV);这些疫苗的暴露前和暴露后的抗体应答率>99%,与狂犬病免疫球蛋白(RIG)或抗狂犬病血清联合使用,对暴露后高危人群预防狂犬病发生的有效率几乎是100%(WHO,2005)

20世纪80年代,我国研制的含有氢氧化铝佐剂的原代地鼠肾细胞疫苗取代羊脑疫苗,由于疫苗未经浓缩和纯化,抗原量少,纯度低,虽然较羊脑疫苗大大降低了副反应,不再出现变态反应性脑脊髓炎,但人体应用后效果不甚理想。1993年开始使用浓缩3~5倍的地鼠肾细胞疫苗,但大面积应用后发现副反应很大,主要原因是疫苗没有经过纯化,杂质含量较高。1999年,经纯化的地鼠肾细胞疫苗和Vero细胞疫苗相继在我国上市。

44.6.2 疫苗制造概要

疫苗制备的核心步骤是将狂犬病毒(RABV)接种细胞后,在适宜的温度下培养一定时间。《中国药典》2010版三部要求毒种按0.01~0.1 MOI(感染复数)接种,置33~35℃继续培养适当时间。培养过程中病毒悬液可收获一次或多次,来自同一批生产用细胞的多次收获液可以合并作为单次收获液。病毒液浓缩后加入适宜浓度的灭活剂灭活病毒并纯化,而后加入一定量的人血白蛋白稳定剂为病毒原液。将制备的病毒原液按抗原含量用稳定剂进行混合配制成疫苗,制成液体或冻干剂型(Meslin, et al.,1996)。

WHO最早在1981(WHO TRS 658)中收载了人用狂犬病疫苗制造及鉴定规程, 并于1987(WHOTRS 760)、1994(WHO TRS 840)和2007(WHOTRS 941)相继进行了修订。《中国药典》2010版收载有人用狂犬病疫苗(Vero细胞)、冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)和人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞细胞)共三个品种(国家药典委员会,2010年)。





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