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台湾学者在东亚家蝠中发现新型狂犬病毒:台湾蝙蝠丽沙病毒(TWBLV)

已有 6834 次阅读 2018-10-27 21:49 |个人分类:RV流行病学|系统分类:科普集锦| 台湾, 东亚家蝠, 新型, 狂犬病毒, 丽沙病毒

         2016年至今,台共计从蝙蝠中检出4例新型狂犬病毒。台湾新北市动物健康研究所和台湾大学等单位的研究人员合作,对前2个病例中分离获得的蝙蝠狂犬病毒进行了系统鉴定和分析,证明他们在台湾东亚家蝠中发现的是一种新型狂犬病毒台湾蝙蝠丽沙病毒Taiwan bat lyssa-virus ,简称TWBLV

在今年4月发布的WHO狂犬病专家磋商会报告》(第三次报告)中提到,台湾蝙蝠丽沙病毒是继2014年在斯里兰卡首次发现Gannoruwa蝙蝠丽沙病毒之后,在整个亚洲第二次发现一种新型狂犬病毒。

关于狂犬病毒(丽沙病毒)分类的基本概念:

丽沙病毒属(genus  Lyssavirus也译为狂犬病毒属目前包括十多种不同基因型(genotype的狂犬病毒。

丽沙病毒(Lyssavirus也译为狂犬病毒,可用于表示丽沙病毒属中所有基因型的狂犬病毒,但在某些场合也用于表示丽沙病毒属中除传统的最广泛流行的狂犬病毒(rabies virus以外的十多种不同基因型的狂犬病毒(通常非常罕见),有时也统称为“狂犬病相关”病毒(“rabies-related viruses)。

国际病毒分类委员会(International Committee on the Taxonomy of Viruses规定,用于区分丽沙病毒属内不同基因型丽沙病毒的遗传距离:完整N基因的核苷酸同一性阈值80-82%(能提供比其他基因更好的定量分辨率),或N + P + M + G + L基因连锁编码区的80-81%核苷酸同一性。 一般而言,属于同一物种的所有分离株具有比阈值更高的同一性值(除了目前包含在拉各斯蝙蝠狂犬病毒中的病毒种类)。

东亚家蝠(Pipistrellus abramus)在中国大陆地区也广泛存在,台湾学者的此项新发现对中国大陆地区的相关研究和管理部门的人员都有重要参考价值。

 

台湾学者的相关论文于今年4月发表在美国CDC的专业杂志《新发传染病(Emerg Infect Dis.)》上(Emerg Infect Dis. 2018 Apr;24(4):782-785. doi: 10.3201/eid2404.171696.)。

论文题目:台湾东亚家蝠中的丽沙病毒

Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan

注:东亚家蝠又名日本伏翼,學名Pipistrellus abramus,分类上属于蝙蝠科 Vespertilionidae ,伏翼屬 Pipistrellus


以下是该论文的主要内容:

2016年和2017年,在台湾的2東亞家蝠中发现了一种新型狂犬病毒。该病毒的编码区与其他16种狂犬病毒的核苷酸同源性为62.9-75.1%,表明它可能代表这类病毒的一个新物种

弹状病毒科中的狂犬病毒属14种已得到确认的狂犬病毒组成:狂犬病毒(RABV),拉各斯狂犬病毒(LBV),Mokola狂犬病毒(MOKV),Duvenhage狂犬病毒(DUVV),欧洲蝙蝠狂犬病毒1型(EBLV-1),欧洲蝙蝠狂犬病毒2型(EBLV-2),澳大利亚蝙蝠狂犬病毒(ABLV),Aravan狂犬病毒(ARAV),Khujand狂犬病毒(KHUV),伊尔库特狂犬病毒(IRKV),Shimoni蝙蝠狂犬病毒(SHIBV ),Bokeloh 蝙蝠狂犬病毒(BBLV),西高加索蝙蝠狂犬病毒(WCBV)和Ikoma狂犬病毒(IKOV)(1)。

此外,Lleida 蝙蝠狂犬病毒(LLEBV)(1,2)和Gannoruwa蝙蝠狂犬病毒(GBLV)(3)最近在蝙蝠中被鉴定出来,但它们的分类学状态尚未由国际病毒分类委员会确定。根据遗传距离和血清学交叉反应(1-3),狂犬病毒属可细分为遗传谱系1phylogroup 1,包括RABVDUVVEBLV-1EBLV-2ABLVARAVKHUVIRKVBBLVGBLV)和遗传谱系2phylogroup 2,包括LBVMOKVSHIBV)。其余的物种,WCBVIKOVLLEBV,不能包括在这些遗传谱系的任何一个之中(1,2)。

蝙蝠是大多数狂犬病毒的天然宿主,除MOKVIKOV外(这两种病毒未在任何蝙蝠中发现)(1-4)。关于亚洲蝙蝠中的狂犬病毒的信息是有限的。在中亚,1991年在吉尔吉斯斯坦的小鼠耳蝠(Myotis blythi)中鉴定出ARAV,并且在2001年在塔吉克斯坦的胡须蝙蝠(M. mystacinus)中鉴定出KHUV5)。在南亚,2015年在斯里兰卡的印度飞狐(Pteropus medius)中发现了GBLV3)。尽管伊尔库特病毒(IRKV)于2012年在中国的白腹管鼻蝠Murina leucogaster)中被鉴定出来(6),但对东亚蝙蝠群中狂犬病毒的确切种类和分布的了解仍然有限。

在本文中,报告了在台湾执行相关监测计划时分离获得的一种假定的新型狂犬病毒。研究结果表明,基于遗传距离分析,这种狂犬病毒可能代表一个新的物种。

研究概况

本课题组从2014年到20175月底,共收集了来自13个物种的332只蝙蝠的尸体进行狂犬病毒监测。在收集到的个体样品中,有2个样品通过直接荧光抗体测试和逆转录PCR测试为病毒阳性(7-9)。第一只蝙蝠在没有特定临床症状的情况下显示失去食欲,于201672日在台南市死亡。第二只蝙蝠于2017412日在云林县被发现死亡,尸体被运往新北市动物健康研究所(AHRI)。从这些病例中使用狂犬病毒筛选引物获得了两个428-bp扩增子(N113F / N304R,含有部分核蛋白[N]基因和磷蛋白[P]基因)(表1;然后将它们的序列提呈给BLASThttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST /),并查询GenBank数据库。这两种序列均与狂犬病毒相似,核苷酸同一性<79%。两种蝙蝠通过形态学鉴定为日本伏翼(Pipistrellus abramus)或日本家蝠。然后将2个部分ND1基因序列提交给GenBank;第一个序列被编号为2016-2300GenBank访问号MG763889),第二个序列的编号为2017-1502GenBank登录号MG763890)。

2只蝙蝠的大脑中成功分离出丽沙病毒;通过电子显微镜(11)和核苷酸测序确认为丽沙病毒。此外,在从脑组织中分离出病毒后,对内脏器官和唾液腺进行了逆转录PCR和病毒分离; 两只蝙蝠的唾液腺对这两种测试都呈阳性。

测定了分离的病毒的基因组的核苷酸序列,将病毒命名为台湾蝙蝠丽沙病毒(TWBLV)。第一个TWBLV分离物命名为TWBLV / TN / 2016GenBank登录号MF472710),第二个TWBLV / YL / 2017GenBank登录号MF472709)。通过AHRI设计的12个引物组扩增了2TWBLV分离株的核蛋白(N),磷蛋白(P),基质蛋白(M),糖蛋白(G)和RNA依赖性RNA聚合酶(L)基因(表1 )。 2TWBLV分离株的基因组长度都为11,988个碱基,TWBLV / TN / 2016G + C含量为43.66%,TWBLV / YL / 2017G + C含量为43.83%。基因组组织与其他狂犬病毒组织类似:3'未翻译区(UTR),70nt; N1356 nt; N-P UTR99 nt; P897 nt; P-M UTR82 nt; M609 nt; M-G UTR212 nt; G1629 nt; G-L UTR518 nt; L6384 nt;5'UTR132 nt 2TWBLV分离株在N基因中显示98.7%的核苷酸同一性,在连锁的编码基因(N + P + M + G + L)中具有98.6%的核苷酸同一性。

2中列出了TWBLV与其他16种狂犬病之间不同基因的核苷酸同一性。对于N基因,TWBLVIRKV具有最高同一性(79.0-80.6%),其次是EBLV-1 78.8-79.4%)。 TWBLVEBLV-1的连锁编码基因共享核苷酸同一性(75.1%),其次是IRKV74.0%)。系统发育分析证明,狂犬病毒被分为2个遗传谱系(phylogroups;TWBLV分组至phylogroup 1并与EBLV-1IRKVDUVV归为一簇(cluster)(图)。

结论

本文报告了与EBLV-1IRKVDUVV密切相关的台湾蝙蝠丽沙病毒TWBLVTWBLV的连锁编码基因的全长核苷酸序列显示,与其他16种狂犬病毒的核苷酸同一性为62.9-75.1%(表2),并且TWBLVEBLV-1的关系最密切。由国际病毒分类委员会建立的狂犬病毒物种的划分标准包括遗传距离,拓扑结构,抗原模式和其他特征(12)。基于遗传距离, TWBLV与其他丽沙病毒物种的连锁编码基因的核苷酸同一性未超过75.1%,表明分离的TWBLV是一个新的狂犬病毒物种。

在蝙蝠的唾液腺中存在TWBLV,表明TWBLV可能通过唾液排出。本项研究表明,东亚的蝙蝠可能感染狂犬病毒;然而,由于目前的监测有限,在東亞家蝠和其他蝙蝠物种中狂犬病毒的流行病学仍不清楚。这种不确定性可能会在亚洲各国引发关于公共卫生的一个新话题。

总之,在東亞家蝠中已鉴定出丽沙病毒TWBLV,受感染的蝙蝠可能通过唾液排出病毒。東亞家蝠是东亚低海拔城市地区的常见食虫蝙蝠(13,14)。如果被蝙蝠咬伤,亚洲国家的人应该立即寻求适当的预防措施。对于TWBLV的流行病学和致病性还应当进一步研究。 

相关论文下载:

Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.pdf



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