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关于QPCR生物学重复差的痛苦经历

已有 3339 次阅读 2018-7-20 16:47 |个人分类:随想|系统分类:科研笔记| QPCR

不知道大家有没有和我一样的经历,辛辛苦苦忙了两三个月做的RT-QPCR发现实验数据似乎没有什么用!主要原因在于生物学重复非常差!而造成的原因除了个体基因表达的差异外,盆栽实验的水肥控制,温室的室温控制,取样部位差异等等都是造成生物学重复差的原因。在苦苦挣扎上述错乱数据半个多月后,决定明年再来,直接改大田实验,同时扩大材料数量,避免无材料可取!

今天为什么突然要写这个呢?似乎事情也早已过去,实验室大Boss突然问起我关于之前做的QPCR的结果,我就把种种原因分析给大Boss,潜话就是这次数据只能当一个预实验了,但是大Boss说不行,你得把数据拿出来重新看看,相信总能挖掘出一些东西,不能浪费这么多时间金钱,最后放弃在出结果之前。于是就在网上各处游荡,想找出现同样问题的各位是如何解决的,给我提供一个参考。

终于有一个重要发现,可能对于熟悉QPCR的大佬来说,这是一个小case。但是却使我抽丝剥茧,从我之前错乱数据中找到了一个很有趣的位点。下面是给我启发的博客原地址:http://blog.sina.com.cn/s/blog_c59b7d1e0102wvok.html

辛亏之前不嫌麻烦设了两个内参,参考两个内参相对表达量的数据,将内参表达奇异的整个所有数据全部剔除,得到了目前来说对我很重要的趋势图!希望也能给大家带来一些帮助。



http://blog.sciencenet.cn/blog-3389863-1125093.html

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1 李万峰

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