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CRISPR/Cas9技术在异源四倍体棉花中的应用获得新进展

已有 5331 次阅读 2017-6-17 22:41 |系统分类:科研笔记

     (本条内容转自华中农业大学新闻网)据华中农业大学新闻网报道:华中农业大学棉花研究团队有关CRISPR/Cas9技术在异源四倍体棉花中的应用获得新进展,相关成果在线发表于《Plant Biotechnology Journal》上,题目为《High efficient multi-sites genome editing in allotetraploid cotton (Gossypium hirsutum) using CRISPR/Cas9 system》。

         CRISPR/Cas9系统为生命科学研究的关注热点和近年来最受欢迎的基因组编辑系统。目前该技术广泛应用于动物细胞,植物中在水稻、拟南芥、玉米等模式作物中应用较多,而在多倍体植物,如棉花,油菜中的应用较少。原因在于目前生产上种植的棉花是异源四倍体,有52条染色体,基因组庞大(2.5 Gb,相当于拟南芥基因组大小的20倍,水稻基因组的6倍),同源重复序列多(70%左右),同一基因也具有多个拷贝,很难获得有效的单基因突变体。

     华中农业大学棉花团队构建了适用于棉花遗传转化体系的 TALEN 载体及三套CRISPR-Cas9系统。在此研究使用的载体是该实验室运用的第三套CRISPR-Cas9系统,该系统针对水稻中已有的CRISPR/Cas9表达载体进行了改造,使用了棉花內源的U6启动子和合适的抗生素筛选标记。利用一个已经获得外源报告基因DsRed2的材料为受体进行二次转化,实现了两个靶标位点的同时敲除,再生植株的红色荧光完全消失。另外,以内源的棉花叶绿素合成相关基因 GhCLA1 为靶标设计的三对 sgRNA 也成功实现基因敲除,各靶标位点的编辑效率达到66.7%100%,再生植株产生显著的白化苗表型。对T0代植株及其后代的的遗传分析表明,目标基因可以被突变但没有脱靶效应,而且这种突变能够稳定遗传到后代。


     此研究创新之处在于充分结合第二代高通量测序技术,实现对大量再生植株突变位点的快速鉴定,大大提高转基因植株突变鉴定的效率,为实现 CRISPR/Cas9 系统创造棉花基因突变体库及功能基因组研究打下坚实基础。目前这一高效的棉花基因编辑载体已经通过合作研究的形式发放给包括澳大利亚联邦科学与工业研究组织(CSIRO)、浙江大学、南京农业大学、华中科技大学、华中师范大学、西南大学、山东农业大学、石河子大学、中国棉花研究所等国内外10多家国内外科研机构的同行,共同推动棉花的基因组编辑工作。(本条内容转自华中农业大学新闻网)。



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