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卵母细胞凋亡信号检测(JC-1标记法)
实验目的:卵母细胞线粒体极性检测,是为凋亡的早期标志。凋亡细胞中异常线粒体,JC-1为单体,绿色;正常线粒体JC-1为聚体,红色。正常细胞之凋亡与否,以红比绿的比值做评估。
试剂耗材:
(1)细胞培养液:M2或M16等,可以加入米力农(Milrinone)。
(2)JC-1试剂(5mg/mL,分装为小管,避光,-20度保存)。如果有CCCP,可按说明书操作,设计阳性对照。
(3)口吸管、台式镜等设备。
实验样品:ICR品系小鼠。
实验步骤:
(1)JC-1的准备:将JC-1按照1:200比例,用培养液或操作液稀释,避光,做滴,覆盖石蜡油,37度平衡。如需染核,可在JC-1中加入Hoechst,工作浓度100nM。如需要CCCP处理,或者其它处理,在活细胞观察之前30-60分钟内加入Hoechst。
(2)分离裸卵。移入JC-1滴中,37度30分钟。
(3)将卵取出,操作液清洗2次。
(4)将卵母细胞放入玻璃底培养皿中,在激光共聚焦上观察。
(5)注意,JC-1的染色结果,可能受到米力农的影响,待确认。
问题分析:
(1)JC-1标记SN期卵母细胞,似乎细胞之间差异甚大,思考其中原因。
(2)哪种因素能使卵母细胞凋亡。
(3)自卵母细胞发生凋亡,至于卵母细胞之死,需要多长时间。
(4)卵母细胞如何抵抗胁迫,哪一信号是导致卵母细胞进入凋亡的终极信号。
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GMT+8, 2024-9-23 22:26
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