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卵母细胞染色体铺片(低渗法与爆炸法联用)

已有 4790 次阅读 2018-12-10 11:13 |个人分类:实验技术|系统分类:科研笔记

卵母细胞染色体铺片(低渗法与爆炸法联用)

 

实验目的:染色体数量形态的观察,调整后可标记抗体。

试剂耗材:

          1%柠檬酸。

          100mM蔗糖。

          固定液(1%多聚甲醛,水溶,pH9.2,用NaOHpH,之后加Triton X-1000.15%,之后加DTT3mM,四度保存)。

          (酸性台式液,PBS+BSA

          Hoechst/Dabco混合液,载玻片盖玻片等。

实验样品:卵母细胞(也可以是精子各阶段细胞,中期的体细胞)。

实验步骤:

          1)卵母细胞去透明带。

          2)将卵放入80微升低渗液中(0.5%柠檬酸,50mM蔗糖),室温30min

          3)将卵移到100mM蔗糖中(此步可选)。

          4)在载玻片上用胶水(我使用的是502,还没有摸索好)画出一定区域,加固定液10-20微升,涂抹载玻片0.5-1cm2的区域,将卵母细胞以一定距离,排列到包被固定液的载玻片上。4度过夜,可晾干液体,但不可完全干,否则背景噪声大;也可不晾干液体。

          5)在盖玻片上滴加Hoechst/Dabco混合液,盖在卵子分布的区域,四度20min,盖玻片四角用指甲油封住,观察。

 

问题分析:

          1)第四步完成后,可以进行封闭,一抗孵育,清洗,二抗孵育等操作。

 

          




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