卵母细胞染色体铺片（低渗法与爆炸法联用）

实验目的：染色体数量形态的观察，调整后可标记抗体。

试剂耗材：

          1%柠檬酸。

          100mM蔗糖。

          固定液（1%多聚甲醛，水溶，pH9.2，用NaOH调pH，之后加Triton X-100至0.15%，之后加DTT至3mM，四度保存）。

          （酸性台式液，PBS+BSA）

          Hoechst/Dabco混合液，载玻片盖玻片等。

实验样品：卵母细胞（也可以是精子各阶段细胞，中期的体细胞）。

实验步骤：

          （1）卵母细胞去透明带。

          （2）将卵放入80微升低渗液中（0.5%柠檬酸，50mM蔗糖），室温30min。

          （3）将卵移到100mM蔗糖中（此步可选）。

          （4）在载玻片上用胶水（我使用的是502，还没有摸索好）画出一定区域，加固定液10-20微升，涂抹载玻片0.5-1cm²的区域，将卵母细胞以一定距离，排列到包被固定液的载玻片上。4度过夜，可晾干液体，但不可完全干，否则背景噪声大；也可不晾干液体。

          （5）在盖玻片上滴加Hoechst/Dabco混合液，盖在卵子分布的区域，四度20min，盖玻片四角用指甲油封住，观察。

问题分析：

          （1）第四步完成后，可以进行封闭，一抗孵育，清洗，二抗孵育等操作。