2013年MD Anderson癌症中心的Cooper实验室发表了一篇关于使用非病毒转染方法，制备临床级CAR--T细胞的文章，是使用所谓“睡美人”（Sleeping Beauty，SB)基因修饰系统生产稳定的人CAR-T细胞。到2016年9月，这项研究已经转化为免疫治疗临床试验结果，发表在杂志（J Clin Invest 2016，Phase I trials usingSleeping Beauty to generate CD19- specific CAR T cells）。

           这项工作评估了SB转座子/转座酶系统进行基因修饰表达CD19抗原特异性CAR-T细胞的临床应用潜力。使用来自SB平台的DNA质粒基因修饰T细胞，使之稳定表达第二代CD19特异性CAR，同时使用活化和增殖细胞（activating and propagating cells，AaPCs）和细胞因子体外培养系统选择性扩增CD19-CAR-T细胞。

             在二十六名晚期非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病患者中进行了造血干细胞移植（HSCT）和输注CAR-T细胞作为辅助治疗，其中自体移植7例，同种异体移植19例。

            治疗结果显示SB介导的基因修饰T细胞能在体外扩增2,200至2,500倍，CAR表达率可达84％，未发现有整合热点存在。在自体移植组移植和CAR-T治疗后，30个月无疾病进展生存期和总生存期分别为83％和100％。在同种异体移植组，12个月无疾病进展生存期和总生存期分别为53％和63％。

  未发现有急性或晚期毒性发生，也未见有严重移植物抗宿主疾病发生。尽管存在低抗原负荷量和在没有细胞因子支持的移植受者体内环境中，CAR-T细胞在自体受者体内能维持平均存在201天，在异体受者体内平均维持存在51天。

   这些结果显示使用SB和AaPCs平台产生的CD19特异性CAR-T细胞是安全的，不仅消除了病毒复制的危险性，也减少了CAR-T细胞的制备时间，可以辅助造血干细胞移植治疗癌症，显示了非病毒性基因修饰的治疗方法将来进一步临床发展的潜力。    http://blog.sina.com.cn/s/blog_8079e9f50102wy43.html